适合企业兽医实验室的药敏实验操作

随着养殖业的发展，药物的滥用致使耐药菌株不断增加。现在只凭一双剪刀，一双眼睛来对动物疾病进行诊断然后用药的时代逐渐过去，临床诊断与实验室诊断相结合的形式越来越多。现在大型养殖场及养殖集团、部分动保企业都设有专门的疫病实验室，对临床出现的疾病进行诊断并指导用药。

适合企业兽医实验室的药敏实验操作

亚康药业兽医实验室秉承着为畜牧养殖服务的原则，正在逐步开展一系列实验，现在就药敏试验做一下介绍。体外用药为体内用药提供依据是国际通用并广泛认可的方法，药敏试验结果并不一定百分百准确，但是指导体内用药是最简单也最有效的。

应用的药敏试验标准执行中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学会颁布的《动物源细菌抗菌药物敏感性试验纸片法与稀释法执行标准》。该标准已通过美国临床和实验室标准协会（CLSI）的一致性评议并批准发布。同时药敏实验之前必须按照《伯杰细菌鉴定手册》对细菌进行初步鉴定，鉴定的目的：一、不同细菌的同一种药物抑菌圈大小的标准是不一样的，测定细菌准确后可以根据细菌种类判定结果；二、从理论上选择实验药物；三、验证临床解剖眼观病变的准确性。

适合企业兽医实验室的药敏实验操作

药敏试验共经历采集病变部位样品→细菌培养→对每种细菌纯培养→生化试验初步鉴定细菌→药敏试验→测量结果这几个步骤，至少需要72小时才能出结果。

第一步，采集病变部位样品。采集样品要根据临床的症状来进行采集，例如狐狸的神经症状疾病，我们就需要采集脑组织；鸡的包心包肝型大肠杆菌病，我们就需要采集肝脏。

第二步，细菌培养。细菌培养要选用营养相对丰富，能够保证尽可能多的动物源性病原菌生长的培养基，现在大部分我们采用鲜血培养基和V因子培养基。采用鲜血培养基的优点是溶血性的细菌会出现明显的溶血环，这为我们鉴定细菌提供了帮助，而且营养也有保证。细菌培养过程需要37℃16-24h。

第三步，对每种细菌纯培养。在细菌培养步骤中出现的所有形态不一的菌落都需要进行纯培养，小的、透明的、光滑的菌落要重点研究，是致病菌的可能性较大，也要选择营养较高的培养基。这个步骤的细菌培养需要37℃16-24h。

第四步，生化试验初步鉴定细菌。我们按照《伯杰细菌鉴定手册》标准做包括染色、细菌形态观察、各种生化试验进行初步鉴定，简单确定该细菌属于哪个种属。

第五步，药敏试验。药敏试验按照《动物源性细菌抗菌药物敏感性试验纸片法与稀释法执行标准》来进行，我们实验室用的最多的是纸片法，稀释法主要用来研究抗生素的使用剂量。药敏试验过程需要温箱37℃培养16-24h。

最后一步通过游标卡尺测量抑菌圈来判定抗生素的抗菌效果。值得注意的是最后的抑菌圈可能会有内外圈的情况发生，即内圈跟外圈之间的细菌浓度小于外围细菌浓度，这时候我们需要按照大圈直径读数，原因在于有些抗菌药的作用时间存在时间限制，当药物失效后，外围的细菌会逐步向内生长，对该药物应用时要注意一天多次用药以达到有效浓度。

药敏实验对洁净度要求很高，必须要在无菌条件下进行，所有实验过程在无菌室内的超净工作台或者生物安全柜内操作。

现在仍然有相当一部分实验室的药敏试验只是简单的用肝脏对平板涂布然后贴上药敏片培养18h左右就出来结果。这个方法是错误的。一是不同细菌的培养的时间是不同的，不能一概而论；二是这种操作得出的结果永远只有一两种广谱抗菌药起作用，甚至没有任何药物是敏感的，原因在于只是把能杀灭所有病原微生物的广谱抗菌药选择出来，而把窄谱药或者对一部分细菌耐药的药物给埋没了，随着细菌耐药菌株越来越多，能够选择的药物必然也会越来越少。

药敏实验不能万能的，不能简单的说药敏实验筛选出来的药物一定会有效，但是药敏实验不敏感的药物大多数时候是没有效果的。

来源：亚康药业兽医实验室