猪体的免疫反应是一个复杂的生物学过程,受诸多内外因素的影响。近年来,在人工免疫过程中,发现因应激、免疫功能下降或免疫抑制等原因都可导致畜禽免疫效果下降,如何提高猪体的免疫功能是摆在兽医研究工作者面前的一个重要课题。中药可调整和明显增强机体免疫功能,使参与细胞免疫的细胞数量增加、活性增强,使参与体液免疫的抗体增加。本试验旨在探讨中药对猪接种猪瘟疫苗后的免疫调节作用,为养猪生产提供可靠的依据。?
1 材料与方法 ?
1.1 中药免疫增强剂由黄芪、党参、何首乌、淫羊藿、女贞子、白术、白芍、五味子、当归、鹿角胶、麦冬11味中草药组成。按比例配方粉碎过60目筛,塑料袋500g分装备用。
1.2 猪瘟兔化弱毒苗 山东齐鲁动物药品厂生产,批号:040208。?
1.3 猪瘟正向间接血凝诊断液(包括阴性、阳性血清和稀释液) 购自中国农业科学院兰州兽医研究所,批号为20040304。?
1.4 其他材料 96孔110°V型血凝板、50 μl微量移液器、微型振荡器等。?
1.5 实验猪由临沂师范学院郯南养殖基地和苍山县畜牧局良种猪繁育示范场提供,选30~35日龄的健康三元杂交仔猪〔杜洛克×(约克夏×长白)〕,试验分别在临沂和苍山县两地进行,两地分别选取仔猪各100头(公母各半),随机分为5组,每组20头,Ⅰ组为不用药对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 组为中药免疫增强剂低、中、高剂量试验组,Ⅴ组为安全试验组。 ?
1.6 试验方法 Ⅰ组不用药;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 组从疫苗接种的当日开始,用自制中药免疫增强
剂分别按?0.5%?,1%,1.5%3个添加水平混饲给药,以上各组连续用药3天。于投药第1天,试验组与对照组均进行猪瘟兔化弱毒苗接种,每头仔猪2头份。Ⅴ组按6%饲料添加中药免疫增强剂,连续用药7天,停药观察10天。试验期间5个组饲养管理条件基本一致。
1.7 血样 于疫苗接种前一天和疫苗接种后的15天、45天、75天和105天,分别由试验组和对照组猪只耳静脉采血5ml,析出血清,供测定血清抗体用。同时,分别取试验组和对照组猪只血样作成血涂片,供检测T淋巴细胞用。
1.8 抗体检测 用正向间接血凝试验(IHA)法测定血清抗体效价水平。其操作方法和判定标准,均按《猪瘟正向间接血凝诊断试剂使用说明书》进行。试验数据取几何均数,试验组和对照组的数据比较用t检验分析。?
1.9 T淋巴细胞计数 应用酸性α?醋酸萘酯酶(ANAE)染色法,检查血涂片中T淋巴细胞占淋巴细胞总数的百分率。?
2 试验结果 ?
2.1 猪瘟抗体水平见表1由表1可以看出,4个组的母源抗体水平均在1∶8~1∶64之间,比较平稳。试验结果表明,以1%和1.5%添加中药免疫增强剂的实验猪,IHA抗体效价水平都显著高于对照组(P<0.05),而且试验组抗体产生的快,持续时间长。Ⅰ组和Ⅱ组之间差异不显著(P>0.05),试验Ⅲ组、Ⅳ组之间差异不显著(P>0.05)。说明以1%添加中草药免疫增强剂对猪瘟抗体产生、免疫抗病能力的提高具有明显的促进作用。低剂量添加效果不明显。
2.2 T淋巴细胞检查结果试验组和对照组猪只于疫苗接种后,外周血液中T淋巴细胞检查结果见表2。由表2可以看出,于疫苗接种后15天,试验中、高剂量组猪只T淋巴细胞的百分率平均值显著高于对照组(?P?<0.05)。于疫苗接种后的45天、75天和105天,3个
试验组T淋巴细胞的百分率平均值虽略高于对照组,但组间差异不显著(?P?>0.05)。对照组和低剂量组之间差异不显著(?P?>0.05),试验中、高剂量组之间差异不显著(?P?>0.05)。说明以1%的剂量添加中药免疫增强剂有较好的免疫增强作用。低剂量添加效果不明显。?
2.3 安全试验Ⅴ组按6%的饲料添加中药免疫增强剂,连续用药7天,停药观察10天。期间未发现任何不良反应,试验结束后随机取安全试验组和对照组仔猪各2头剖检观察各脏器无异常变化,安全试验组与对照组间也无肉眼可见的差异,主要器官(肝、胃、十二指肠、空肠、回肠和肾)组织切片亦未见异常变化。说明该药安全且有效。
3 讨论
3.1本研究结果可以看出,于疫苗接种的当天,以1%的剂量添加中药免疫增强剂混饲给药,可显著提高猪的IHA抗体效价水平,与对照组比较差异显著(?P<0.05)。而且试验组抗体产生的快,持续时间长。说明中草药免疫增强剂对猪瘟抗体产生具有明显的促进作用。可有效地提高猪的体液免疫作用。?
3.2研究结果同时表明,中草药免疫增强剂能使猪只接种猪瘟疫苗后15天,外周血液中T淋巴细胞的百分率比对照组显著增高?(P<0.05),显示中草药免疫增强剂具有促进T淋巴细胞增殖和加强T细胞免疫功能作用。从而提高了机体的细胞免疫水平。
3.3 本制剂为纯中药,无毒副作用、无残留,混饲给药,十分方便,应激小,值得推广。
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