黄芪皂苷类成分的HPLC指纹谱研究

??摘 要： 目的：研究黄芪药材皂苷类成分的指纹谱。方法：色谱柱：Hypersil

ODS（4.6×250mm，5-Micro），流动相：乙腈：水（梯度洗脱），柱温：30℃，检测波长：203nm，分析时间：60min，流速：1.0ml/min。结果：共标出黄芪药材13个共有峰。结论：该方法可用于黄芪药材的指纹图谱质量控制。

??关键词 黄芪 色谱指纹谱 HPLC

??指纹图谱质控技术是保证中成药功效、实现中药现代化的关键<1>。控制中成药质量，首先要抓源头，控制中药材的质量。蒙古黄芪分布于河北、山西、内蒙古。本文研究所用黄芪产地来源于山西雁北地区。山西雁北地区的浑源、应县、阳高等地的黄芪，品质极佳，该地区种植面积16000公倾，出口量占我国黄芪出口量的60%以上<2>。本文采用HPLC研究了山西产蒙古黄芪的指纹图谱，以控制药材质量。

1 仪器与试剂

??1.1 仪器

??Agilent1100高效液相色谱仪，包括：四元泵，在线脱气机，柱温箱，VWD检测器，化学工作站（chimstation

system工作站）；

??1.2 试剂

??乙腈：HPLC级，美国天地（TEDIA）试剂公司。

人参皂苷Re对照品：中国药品生物制品检定所，批号：0754-9608。

2 方法与结果

??2.1色谱条件

??柱：ZORBAXSB-C18（4.6×250mm，5-Micro）；柱温：30℃；检测波长：203nm；分析时间：70min；流速：1.0ml/min；进样量：供试品溶液与对照品溶液各20ul；理论板数以人参皂苷Re计算应不低于200000。

??2.2 内标选择与配制

??对照品选择：黄芪甲苷对照品吸收较弱，且样品中其对应峰很低，不便于分析；人参皂苷Re在此分析条件下与黄芪中其它成分可较好分离，因此选作内标，图1为加有内标人参皂苷Re的药材样品图，图2为人参皂苷Re的图谱，图3为未加内标的药材样品图。

??对照品配制：精密称取人参皂苷Re对照品2mg，置5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

??2.3 供试品的制备

??取药材粗粉2g，加甲醇50ml回流提取2次，每次2小时，合并甲醇液，回收甲醇，残渣加热水10ml溶解，用等量水饱和的正丁醇萃取5次，合并正丁醇液，用等量氨试液洗涤一次，弃氨试液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加60%乙腈溶解至5ml，离心，过滤，取滤液1ml，加内标（人参皂苷Re0.4mg/ml）1ml，摇匀，作为供试品溶液。

??2.4 流动相的选择

??经试验比较，以乙腈：水为流动相，梯度洗脱能较好地使样品中各色谱峰分离且出峰最多；分析时间60分钟，样品2小时图谱显示，60分钟后无特征峰出现。

??2.5 方法学考察

??（1）稳定性试验：

??取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、24小时检测，其相对保留时间稳定，主要共有峰相对峰面积RSD为1.45%。结果表明：供试品溶液稳定性较好。

??（2）精密度试验：

??取同一供试品溶液，连续进样5次，其主要共有峰相对峰面积RSD为1.13%，符合规定。

??（3）重现性试验：

??取同一批号供试品5份，分别处理测定，主要共有峰相对峰面积RSD为0.86%，符合规定。

??2.6 样品测定

??①测定了10批样品，其指纹图谱峰相对保留时间：表1。

??②样品指纹图谱中主要峰的相对峰面积：表2。

3 结论与讨论

??3.1以人参皂苷Re为内标，研究标示了蒙古黄芪药材指纹图谱共有峰13个，相对保留时间依次为：0.037、0.059、0.130、0.794、1.027、1.047、1.093、1.125、1.421、1.441、1.456、1.491、1.616。

??3.2 《中国药典》规定黄芪来源于蒙古黄芪与膜荚黄芪，本文研究了山西浑源产蒙古黄芪Astragalus

membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus

(Bge.) Hsiao的指纹图谱。膜荚黄芪的指纹谱及其与蒙古黄芪的指纹谱的特征有待进一步研究。

??3.3 由于黄芪皂苷类成分UV没有特征吸收，因此本文选择其末端吸收203nm作为检测波长，结果表明，方法可行。

??3.4蒙古黄芪在本文条件下指纹图谱的特征为两组7强峰：第一组4强峰相对保留时间依次为：1.027、1.047、1.093、1.125，第二组3强峰相对保留时间依次为：1.421、1.456、1.491，比较容易识别。