鸡大肠杆菌病（Colibacillosis）是由埃希氏大肠杆菌（E.coli）的某些致病性细菌株引起鸡的多重疾病的总称，目前对于大肠杆菌病的治疗主要采取疫苗免疫、抗生素和化学药物防治等措施，其中菌苗免疫因其血清复杂，常导致免疫效果不确切，因此抗生素和化学药物仍是防治该病的主要药物，但是由于抗生素耐药菌株的不断出现，许多抗生素和化学药物在连续应用2～3年后则效果不佳，新型抗生素和化学药物的开发远远不能满足市场需求，而且具有成本高、药物残留等缺点。因此寻求一种抗菌谱广的中草药，对我国畜禽产品的出口有十分重要的意义。
一、单味药抑菌试验
（一）材料
试验菌株肉鸡源大肠杆菌。
培养基普通营养琼脂、麦康凯琼脂按常规方法制备。
单味中药金银花、防风、板蓝根、白芷、连翘、杏仁、射干、辛夷、贯众、羌活、荆芥、藿香。中药煎制与蒸馏后1毫升相当于1克生药。
（二）实验内容
大肠杆菌对中药敏感性的体外实验：平板稀释法 取1毫升原药液为第1支试管，在第2支试管中分别加入0.5毫升原药液和0.5毫升生理盐水，以倍比稀释法稀释至第3支试管，第4支试管为无药对照，先分别把药液倒入无菌的平皿中，后倾入60℃无菌普通营养琼脂或麦康凯琼脂，并迅速混合均匀。制成平板，以无菌的涂布棒蘸取实验细菌均匀涂布于平板平面。置37℃培养箱内培养24小时，观察结果。
大肠杆菌对单味中药的药敏实验：纸片法 将筛选出的对大肠杆菌有明显抑制作用的单味中药制剂制成药敏纸片，测定抑菌圈的大小。方法：取直径为0.6厘米的灭菌滤纸片在原药液中浸泡40分钟，取出备用，在已制备好的平板中，无菌操作放置药敏纸片，每种药物贴6片，然后将平板置37℃培养箱中培养24小时后测定抑菌圈的大小，取其平均值。
（三）实验结果
平板法抑菌试验结果 在低浓度下，防风挥发油、金银花蒸馏液、板蓝根煎煮液及发油、连翘水煮液、贯众煎煮液都有不同程度的抑菌作用；而连翘水煮液、辛夷煎煮液、射干煎煮液、羌活煎煮液、藿香煎煮液、连翘挥发油在高浓度下对大肠杆菌的生长才有明显的抑菌作用。在低浓度下无抑菌作用的中药有金银花挥发油、白芷挥发油、连翘水煮液、杏仁煎煮液，在高浓度下无抑菌作用的有荆芥煎煮液，白芷煎煮液。
纸片法测定中草药对大肠杆菌生长抑制作用实验结果 结果见下表，从下表中可以看出，单味中草药金银花蒸馏液、贯众煎煮液、连翘水煮液、射干煎煮液、藿香煎煮液均有较强的抑菌作用，而防风挥发油、辛夷煎煮液、板蓝根煎煮液、羌活煎煮液的抑菌作用次之。
中草药对大肠杆菌生长抑制作用
注：凡抑菌圈直径大于1.0厘米者为强抑菌，用+++表示；抑菌圈直径为0.8~1.0厘米者为抑菌圈用++表示；抑菌圈直径小于0.8厘米者为弱抑菌；用+表示。
二、中药复方颗粒剂对大肠杆菌的体外抑菌试验
（一）材料
由板蓝根、大青叶、黄连、菌陈、连翘、诃子、黄芩、大黄、秦皮、白头翁按一定比例经提取、精制、浓缩等工艺制成浸膏，加入糖粉、糊精等赋形制成颗粒。
（二）试验菌种与培养基
鸡大肠杆菌是由中国提供的标准菌株，血清型为078；营养培养基按常规方法制作。
（三）体外抑菌实验
1.中药复方颗粒剂药液的制备
取颗粒剂200克，置于三角烧瓶中搅溶，煮沸15分钟，浓缩至每1毫升相当于原生药1克。1000转/分钟离心10分钟，取上清液，8磅灭菌15分钟，4℃冰箱保存备用。
2.体外抑菌实验采用管碟法
在无菌条件下，将复壮后的大肠杆菌接种于试管斜面培养基上，置于37℃培养箱内培养24小时备用，将高压灭菌的琼脂培养基15~20毫升倾入灭菌培养皿内，待其凝固后，接种大肠杆菌，然后将已灭菌的牛津杯等间距置于琼脂表面上，每皿4个，用1毫升灭菌注射器，将颗粒剂药液注入牛津杯内，每杯0.1毫升将平皿盖好，置于37℃恒温培养箱内培养24小时后，测其清晰的药皿抑菌圈直径（毫米），取平均值。
3.判断标准
抑菌圈直径≤10毫米为耐药；10~14毫米为浓度敏感；14~19毫米为中度敏感；≥19毫米为高度敏感。
（四）试验结果
颗粒剂溶液对接触复壮后的大肠杆菌的药敏抑菌圈直径为23.31毫米，依据判断标准为高度敏感，说明中药复方颗粒剂对大肠杆菌有很强的抑制作用。
三、小结与讨论
1. 通过平板稀释法所筛选出的10种中草药，对大肠杆菌都有不同程度的抑菌作用，之所以不用平板稀释法是因为结果不易量化，评定时往往带有主观性，易产生误差而影响结果的准确性。在此把纸片法当作定量试验来具体判定中草药抑菌作用的大小。
从结果可以看出，单味中药金银花蒸馏液、贯众、连翘、射干、藿香对大肠杆菌有明显的抑制作用，而其他中草药对大肠杆菌的抑制作用较弱。
中草药的抑菌浓度是抗生素的1000倍，但是在中草药目前的炮制和使用情况下难以达到如此高的体内浓度，单味中草药还难以替代抗生素，所以应在中草药和抗生素联合使用上进行研究，可以减少耐药性和抗生素的残留。
2.临床上常用氟喹诺酮类药物防治大肠杆菌病，而环丙沙星是目前对革兰氏阴性菌（例如大肠杆菌等）抗菌活性最强的一种。李齐发等分别用环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、培氟沙星对人工感染大肠杆菌的雏鸡肌注给药进行治疗，各药物浓度均为2%，剂量为0.1%毫升/只，环丙沙星对雏鸡大肠杆菌的疗效显著高于培氟沙星（p<0.05），其他试验药物间差异不显著（p>0.05），但以环丙沙星的治愈率最高。
叶红利等用25毫克/千克体重盐酸环丙沙星治疗人工诱发性雏鸡大肠杆菌病，总有效率为72.7%。而对照组总康复率为12.5%。
本次实验结果表明中药复方颗粒剂对大肠杆菌有明显的抑制作用，其药敏抑菌圈直径为23.31±0.95毫米，属于高敏药物，对雏鸡大肠杆菌病有良好的疗效。
3.中草药防治鸡大肠杆菌病应以清热解毒、活血散瘀为治则，本实验所用的板蓝根、大叶青、连翘清热解毒；黄连、秦皮、黄芩清热燥湿、泻火解毒；茵陈清热利湿；诃子涩肠止泻；大黄功积导滞，泻火凉血；白头翁清热解毒，凉血止痢，10味中草药按君、臣、佐、使组方，清热解毒，活血散瘀，标本兼治。
注：此文为2008年吉林农业科技学院毕业论文，指导教师：付玉军。
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