抗生素药敏试纸制作与抑菌试验方法

由于抗生素新品种及其耐药性的不断涌现，需要在兽医临床治疗中进行药敏试验。但市场上又不易买到制作好的药敏纸片，这给药敏试验工作带来了一定的难度。

针对这种情况，笔者查阅了有关资料，结合本地实际，利用兽药的使用说明浓度，自制药敏纸片，通过数十次临床实践，效果较好。

1、纸片的制作及灭菌

选用质量较好的滤纸片(定量滤纸)，用打孔器打成直径为6毫米的圆片，每l00片放入一小瓶中，160℃干热灭菌1-2小时或高压灭菌后，在60℃条件下烘干备用。

2、抗菌药物浓度的配制

（1）计算最小浓度值按药物使用说明上的配料或饮水比例换算成一个基本单位药量(以能准确称量药品的最小值为宜，如0.5克、l克、2克等)，而需要配多少料或饮多少水，则相当于配制浸泡药片的药品浓度时所加蒸馏水的毫升数。例如，药品使用说明上标明5克本品可拌50千克饲料，其换算方法为l克本品可拌10千克饲料，也就是1克本品拌l0000克饲料，相当于药品浓度为l克本品加l0000毫升蒸馏水。

（2）浓度配制准确称取上述基本单位药量(片剂要研磨成粉末后再行称量)，在无菌条件下，按下列分列项用蒸馏水进行倍比稀释。根据以上换算l克本品加10000毫升蒸馏水，即l克本品加10×l0×10×l0毫升蒸馏水。如出现l克本品拌320克饲料等情况，可改成1克本品拌320克饲料，即加l0×4×8毫升蒸馏水。这样改动易形成分列项，并不影响实际效果。因为在配料时可按纸片浓度l克本品拌320克饲料进行拌料。如果所加蒸馏水量较少或现场蒸馏水充足，可不按上述倍比稀释法稀释，而直接按配料或饮水比例一次稀释而成。

3、药敏纸片的浸泡及保存

取l毫升已配制好的药液注入已灭菌的含l00片纸片的小瓶中，置冰箱内浸泡1-2小时后取出烘干，并置冰箱中保存备用(可保存6个月)。

4、链接- 抑菌试验方法

（1）试验方法

用接菌棒按无菌操作从病料中挑取病料接种于肉汤培养基并于37℃培养8～12小时后（菌液浓度一般用肉眼观察有轻微混浊即可使用），用接菌棒将含菌材料（肉汤）用密集均匀划线法，均匀接种于琼脂平板表面。直径为90毫米的培养皿接种菌液1ml，用灭菌镊子将含药滤纸片按标记位置轻贴在平板琼脂的菌层表面（必须一次放好，不得二次移动（见下图）。然后将平板底朝上置37℃温箱内培养18～24小时，观察结果。

（2）结果判断

用米尺测量抑菌圈直径大小。抑菌圈>10毫米为低敏，>10～15毫米为中敏，>15毫米～20毫米为高敏，>20毫米为极敏，