板蓝根多糖的提取及含量测定

摘要目的：从板蓝根中提取多糖，并测定其含量。方法：用水提醇沉法提取板蓝根多糖，用酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果：测得板蓝根中多糖含量0.8099%，平均回收率为98.74%，RSD=1.86（N=5）。结论：板蓝根多糖含量不是很高，提取方法有待进一步改进。

关健词：板蓝根多糖提取含量测定

板蓝根（Indigowoadroot）为十字科植物菘蓝的根。菘蓝是二年生草本，植株高50～100cm,花期4～5月，果期5～6月。我国许多地区都有分分，主产于河北安国，江苏如皋、南通等地，各地亦有栽培。板蓝根呈圆柱形，稍扭曲，长10～20cm，直径0.5～1cm，气微，味微甜后苦涩。板蓝根含靛蓝，多种氨基酸，另含有12%氯基酸的蛋白多糖。板蓝根有抑菌作用，对实体瘤有一定治疗作用。板蓝根多糖25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg腹腔注射可明显增强小鼠对二硝基氯苯的迟发型变态反应，诱导体内淋巴细胞转化和增强脾细胞的自然杀伤活性，腹腔注射板蓝根多糖50mg/kg，可显著促进小鼠免疫功能，增强抗体形成细胞功能，增加小鼠静注碳廓清速率。

本实验对板蓝用石油醚、***除去脂溶性杂质，用80%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及苷类等干扰性成分后，再用水提醇沉法制得板蓝根粗多糖，并采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定。

1 仪器、试剂及样品

UV-2401 PC紫外分光光度计（日本岛津），索氏提取器。

葡萄糖（105°C干燥恒重），苯酚（AR），硫酸（AR）。

板蓝根：采自本校药园，秋季挖根，洗净晾干，破碎后备用。

2 标准曲线的绘制

2.1 标准葡萄糖溶液的配制

精密称取干燥恒重的葡萄糖25.2mg，加适量水溶解，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.8ug/ml标准葡萄糖溶液备用。

2.2 5%苯酚试剂的配制

取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g,蒸馏，收集182。C馏份，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

2.3 标准曲线绘制

精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，然后加H2SO47.0ml，充分摇匀，室温放置25min，在400～600nm处测定其最大吸光度，同时做一空白。结果见表1

表1不同浓度葡萄糖的吸光度

葡萄糖标准液(ml)

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

浓度(ug/ml)

0.00

1.05

2.10

3.15

4.20

5.25

6.30

7.35

吸光度值A

0.000

0.0735

0.1458

0.2235

0.2945

0.3798

0.4420

0.4973

3 多糖的提取及精制

取板蓝根洗净，晾干，精密称取100g，置索氏提取器中，依次用石油醚（60～90°C）、***和80%乙醇回流提取4h。残渣用***、无水乙醇反复洗涤，得板蓝根多糖。60°C烘干备用。

4 换算因素测定

精确称取60°C干燥恒重的板蓝根多糖20mg，水溶解后定容到100ml量瓶中，摇均，作为多糖储备液。

精确量取多糖储备液0.2ml，加水至1ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素。

f=W/CD

式中：W为多糖重量(ug)，C为多糖液中葡萄糖的重量(ug)，D为多糖的稀释倍数。测得f=4.7829。

5样品测定

精确分别称取板蓝根粉未0.2g、0.201g、0.203g，用80%乙醇回流2h，残渣挥去溶剂后，继续用水回流2h，反复洗至250ml量瓶中，定容，摇匀成为样品液。测定时，精确吸取样品液1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量：

多糖含量%=CDf/W*100%

式中：C为样品溶液的葡萄糖的重量(ug),D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因素，W为样品的重量(ug)，测得平均结果为0.8099%=0.28%(n=3)

6 回收率测定

精密称取板蓝根粉未0.15g，精密加入板蓝根多糖7mg，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，残渣挥去溶剂后，连续用水回流2h，反复洗至250ml量瓶中定容。摇匀后，清确移取1ml，按测定标准曲线进行提取和测定。计算多糖含量，平均回收率为98.74%,RSD=1.86%(n=5)。

7 讨论

多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂，它能提高机体免疫系统的功能，不仅能促进T细胞、B细胞、NK细胞、M细胞等免疫细胞的功能，还能促进白间素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生。目前对多糖的研究方兴未艾，多糖的作用机理以及生物功能与结构的关系的研究不断深入，而且不断有新的多糖物质被发现。我们从板蓝根中提取出板蓝根多糖，并对其含量进行了测定。研究表明，板蓝根多糖含量不是很高，提取方法有待进一步改进。板蓝根多糖的结构组成和生理活性也有待进一步研究。