山楂叶含量测定方法（金丝桃苷）

山楂叶为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge. var. major N.E.Br.或Crataegus pinnatifidaBge.的干燥叶，收载于2005版《中国药典》一部中。对其含量测定，2005版药典采用HPLC法测定金丝桃苷的含量；紫外分光光度法测定总黄酮的含量。文献报道的金丝桃苷的含量测定方法主要是采用高效液相色谱法，紫外分光光度法应用很少，一般为测定总黄酮的含量，现就HPLC法测定金丝桃苷的HPLC方法作一介绍。

⑴ 2005版药典山楂叶含量测定项：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-四氢呋-0.5%冰醋酸溶液（1：1：19.4：78.6）为流动相；检测波长为363nm.理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于3000。

供试品溶液的制备：取本品细粉1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取叶蒸干，3加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为溶液。

⑵文献报道的高效液相色谱法

常用的实验仪器：Waters高效液相色谱仪(美国)：510泵，2487紫外检测器；浙江大学色谱工作站；日本岛津LC-10AVP系列高效液相色谱仪，SPD-10A VP可见紫外检测器；UV-265FW 自记式分光光度计；PE200高技液相色谱仪，PELC-295紫外可见检测器；日本岛津LC-10Av高效液相色谱仪(包括在线脱气机、二元泵、SPD-M1OAVP二极管阵列检测器，CLASS-VP5.03软件)。

色谱柱：天津凯德ODS色谱柱(150mm×4.6 mm，5μm)；Kromasil，KR100-5 Cl8(250mm×4.6mm，5μm)；Inerteil ODS 2(250mm×4.6 mm，5μm)；Intersil ODS-3C18柱(250mm×4.6mm，5μm)(GL Science Co．Ltd)；：迪马公司DiamonsilC18分析柱(250mm×4.6 mm，5μm)；流动相：)；依利特Hy persil BDS Cl8 5μm(4.6×2OOmm)。

流动相：甲醇-磷酸水溶液；乙腈-冰醋酸；乙腈-四氢呋喃-水-甲酸；甲醇-磷酸-三乙胺；：乙腈-水-36％乙酸等系统。

检测波长：360nm、256（257）nm、358（361）nm、255nm等。

样品的处理：不同浓度的甲醇溶液、丙酮溶液、乙醇溶液提取，经微孔滤膜过滤即可。