高效液相色谱法测定驻春胶囊中淫羊藿苷含量

摘要：目的：建立驻春胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法：采用Zorbox zlipse XDB色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-水(31：69)，流速0.3mL／min，检测波长：270nm。结果：淫羊藿苷在0.29～4.64μg范围内线性关系良好，r=0.9996。回收率为103.2％，RSD=1.24％(n=5)。结论：本法操作简便、准确，可作为驻春胶囊的质量控制方法之一。
关键词：驻春胶囊；淫羊藿苷；HPLC；含量测定
驻春胶囊是治疗骨质疏松症的中药制剂，由淫羊藿、蛇床子、补骨脂、丹参、延胡索、枸杞子、香附等10味中药组成，具有补肝益肾、健脾坚骨的功能。用于骨质疏松引起的腰背腿痛、酸沉无力，骨质退化引起的退行性关节炎。药理学研究表明该药物有提高实验大鼠皮质骨的抗冲击能力，改善松质骨的抗挤压能力，对实验性骨质疏松大鼠有积极的防治作用。淫羊藿是君药，淫羊藿苷是防治骨质疏松的主要有效成分之一 ，因此选择淫羊藿中淫羊藿苷作为含量测定指标，建立了含量测定方法，为控制质量提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪，H54AR分析天平，TP-500型超声波清洗机。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号0737―200011)，驻春胶囊(本院制备)。甲醇、乙腈为色谱纯(北京化学试剂厂)，水为重蒸馏水，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 色谱柱Zorbox Zlipse XDB(4．6mm×150mm，5μm)，流动相：乙腈-水(31：69)，流速：0.30mL／min，检测波长：270nm，柱温：室温。此条件下淫羊藿苷与其它组分达到基线分离。流动相的选择，试验中还曾以文献报道的流动相进行对比试验，结果表明，乙腈-水(85：15)分离效果好，分离度值大。理论塔板数按淫羊藿苷峰计不低于2000。
2．2 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品5.8mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液，浓度为0.232mg／mL。
2．3 供试品溶液制备 取本品内容物研细，混匀，称取1g，精密称定，加25mL稀乙醇超声提取60min，补足失去重量，滤过，取续滤液为供试品溶液。同法制成缺淫羊藿的阴性对照溶液。
2．4 专属性试验 照上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱在此保留时间无干扰。
2．5 标准曲线的制备 取对照品溶液，用甲醇稀释成0.029、0.0387、0.058、0.116mg／mL的溶液，精密吸取上述对照品溶液10μL和0.232mg／mL对照品溶液10、20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以淫羊藿苷色谱峰峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程Y=2430.6X+786.7，r=0.9996。结果表明淫羊藿苷在0.29～4.64μg范围内与其色谱峰峰面积呈线性关系。
2．6 精密度试验 精密吸取0.058mg]mL的对照品溶液10μL，连续进样8次，测得峰面积平均值为2120.65．RSD=0.75％
2．7 稳定性试验 取供试品溶液，在0、1、2、4、6、12、24h分别进样10μL，测定淫羊藿峰面积值，峰面积平均值为1887.42，RSD=1.26％，表明供试品溶液较稳定。
2．8 重复性试验 取同一批供试样品，按样品测定项下方法，连续测定5次，得淫羊藿苷平均含量为1.30mg／g，RSD=3.09％。表明样品的重复性良好。
2．9 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品，分别定量加入0.232mg/mL对照品溶液，照供试品溶液制备方法制备和样品测定项下的方法进行测定。结果可见平均回收率=103.2％，RSD=1.24％。
2．10 样品测定结果 精密称取3批样品，制成供试品溶液，分别吸取供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，依法测定，计算淫羊藿苷含量。
3 讨论
本文采用高效液相色谱法，测定驻春胶囊中淫羊藿苷含量，流动相系统中，流速过大，淫羊藿苷的峰形明显拖尾。对提取方法、精密度、稳定性、重复性、回收率进行考察，均符合制剂质量标准要求，方法可行，可作为控制质量的指标之一。由于淫羊藿的品种、产地、采收加工不同，淫羊藿苷含量差异较大，因此在制剂生产中注意原料的来源，达到含量标准方可投料。