摘要 目的:测定卡马西平片的质量与单剂量健康人群口服后的体内生物利用度参数,分析体内外参数的相关性。方法:用荧光偏震免疫法,按正交拉丁方设计,用双盲法,以自身为对照测定卡马西平片在健康人群中口服的代谢情况。结果:测定的6 个厂家生产的卡马西平片的质量差异较大,溶出度参数差异显著,硬度无规律;其在健康人群中的代谢呈现多峰现象,体内代谢参数与体外溶出参数不能认为有相关性。结论:不同厂家生产的卡马西平片质量差异大,体外溶出参数作为体内吸收的指标不合理,给药个体化十分必要。
关键词 卡马西平片;生物利用度;荧光偏振免疫法;质量控制
卡马西平(carbamazepine ,CBZ) 是一种重要的抗癫痫药物,临床医师和患者反映,服用不同生产厂家,甚至同一厂家不同批号的卡马西平片后出现不同的疗效。现分析了广东地区医药市场使用的部分卡马西平片,测定了其质量和体内药动学参数,为临床合理用药提供参考。
1 实验部分
1.1 仪器和试药
UV-265FW型紫外分光光度计( 日本岛津) ;RCD-6 型溶出度仪;78X2 型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂) ;电子天平(Sartorious ,德国托普仪器有限公司) ;荧光偏振免疫分析仪(美国Abbott 公司) ;超声震荡仪(上海超声波仪器厂) ;自动平衡微型离心机(北京医用离心机厂) 。卡马西平对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,0142-9503) ;卡马西平片(广东地区市售品) ;血清卡马西平单克隆抗体试剂盒(美国Abbott 公司) ;磷酸氢二钠,盐酸和乙酸乙酯(AR) ;盐酸溶液(24 ml 盐酸加水至1000 ml ,超滤即得) ;磷酸氢二钠溶液(3. 58 gNa2HPO4・12H2O 加水至100 ml 用H3PO4 调pH7. 5) 。
1.2 受试对象
体检合格的健康男性自愿受试者12 人,年龄18～24 岁,平均21. 5 ±1. 38 岁,体重55 ±8. 8 kg ,试验前签署知情同意书,试验前两周至试验期间未服其它药物,给药前一天晚上统一进低脂餐,实验期间不允许吸烟与饮用含酒精饮料。
1.3 实验方法
用UV 法于285 nm 处测定卡马西平低、中、高三种浓度(1. 16、5. 80、13. 92μg/ml) 的回收率。精取该对照品用蒸馏水稀释成2. 08 、1. 56 、1. 04 mg/L三种浓度。分别取上述三种浓度的卡马西平溶液0. 1ml ,加入空白血清0. 5 ml 混匀,再加入0. 1 mol/L(pH7. 2) 磷酸盐缓冲液0. 5 ml 混合,用乙酸乙酯1. 5ml 旋涡混合萃取、离心各10 min (2 500 r/min21) ,转移乙酸乙酯层于离心管中,于40 ℃水浴通氮气挥干 ,残渣溶于0. 1 ml 空白血清中,用荧光偏振免疫法测定血清卡马西平低、中、高(3、6、16μg/ml)三种浓度的回收率与RSD 。
1.4 六厂家生产的卡马西平片的质量分析
1.4.1 测定项目:以中国药典为依据,测定市售六个不同厂家的卡马西平片的含量、溶出度、硬度、崩解时限和重量差异,计算溶出参数。
1.4.2 生物利用度试验:健康男性受试者12 名,按正交拉丁方设计,采用双盲法,将受试者均分为三组,以自身为对照,分别交叉空腹顿服A、B、C 三种不同厂家的卡马西平片300 mg(二次服药间隔为三周) ,于1、2、3……131 h 取血1～2 ml ,分离血清,供血药浓度测定用。TDX仪测定卡马西平血清血药浓度为0. 5 mg/L21 ,为了测出受试者3～5 个半衰期或Cmax的1/ 20～1/ 10 的血药浓度,需将低于0. 5 mg/L21的受试者血清按“1.3”项下萃取浓缩。
1.4.3 数据处理与统计分析:用3p87 程序,由计算机自动拟合并确定模型,计算有关参数,多峰的Tmax、Cmax 用三点抛物线法计算。梯形法计算AUC0 →∞。对所用数据进行统计处理和方差分析 ,并做F 检验和t 检验,对A、B、C 三厂的卡马西平片做体内外相关分析 。
2 结果和讨论
2.1 质量考察与溶出度参数
六个厂家的卡马西平片经测定,含量均合格,F厂生产的卡马西平片溶出度和崩解度均不合格,体外累积溶出速率显示国产F 厂溶出最慢,C 厂溶出最快(图1) ,最大溶出量为81. 50 %。崩解时间为A-E 厂是1～16 min ,较理想,而F 厂150 min 尚未崩解;硬度无规律,溶出度参数Td , T50 ,m( P < 0. 01) 的方差分析与成对t 检验均有显著差异(表3) ,表明不同厂家生产的卡马西平片之间质量有显著差异;硬度、溶出度、崩解度之间无相关性。
2.2 三厂的卡马西平片的Ka 、tmax之间有显著性差异( P < 0. 05) ,AUC 无显著性差异( P > 0. 01) ,B、C二厂的卡马西平片的生物利用度分别为107. 73 % ,108. 31 % ,经方差分析,无显著性差异( P > 0. 01) ,认为具生物等效性 , t1/ 2 (39. 59 ±3. 06 h) 与报道一致。
2.3 体内外参数相关分析
将CBZ 片硬度、溶出速率、AUC 进行相关分析,累积溶出速率与体内吸收份数B 厂无相关性,A , C 两厂有相关性: ra = 0. 9293 , rb = 0. 2719 , rc =0. 8892 (表4) ,其余指标间无相关性,表明体外溶出速率要作为体内吸收的参考指标需进一步探讨。
2.4 代谢
实验中首次发现健康人群单剂量口服卡马西平片后在消除半衰期内有双峰与三峰现象, 原因除与肠肝循环有关外, 可能还与药物脂溶性等有关。由于目前用药以单峰吸收为依据,因此临床用药方案有待调整,同时为达到最佳治疗效果,避免毒副作用,给药个体化十分必要。此外还发现志愿人员服药后约0. 5～4 h ,出现了不同程度的嗜睡、头晕现象,休息后缓解。提示广东市场使用的卡马西平片质量差异较大,且有不合格现象,三个厂家的产品,其体内生物利用度无差异,但个体差异及药品的质量不同,因而治疗效果也不同,这与临床结果相符;多峰现象的出现,将导致临床用药方案的改变;溶出速率与体内吸收未见相关性,因而不能作为体内生物利用度的指标。
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