薄层扫描法测定黄皮酰胺的含量

方法：固定相系以硅胶G过240目筛)加0.5％CMC-Na(1：2.5)所制备的薄层板，展开剂为氯仿-甲醇(85：15)，检测波长为λ=259 nm；扫描方式为单波长反射法锯齿扫描，光源氘灯，线性参数Sx=3，振幅为l0，背景校正：结果：此法测得黄皮酰胺含量的平均回收率为97.78％ ，RSD为0.36％ ；其在5.3～53μg／mL范围内浓度与峰面积线性关系良好(r=0.99l9)。结论：用薄层扫描法测定黄皮酰胺的含量，准确度高，重现性好，适合于快速检验。
关键词：黄皮酰胺；薄层扫描法；含量测定
黄皮酰胺(elausenamide，clau)是芸香科黄皮属植物黄皮Clausena Lamium(Lour．)Skeels叶水浸膏分离得到的有效成分，经不对称合成和拆合得到左旋和右旋黄皮酰胺。其中左旋黄皮酰胺为活性成分，具有多方面的药理作用。早期药理实验表明其对四氯化碳引起的小鼠谷丙转氨酶的升高有明显的降低作用。药效学研究提示，左旋黄皮酰胺可促进突触体谷氨酸释放，增加大鼠皮层厚度和海马CA1区数及NMDA受体密度，提高小鼠脑皮层和海马的胆碱乙酰转移酶活性 并对抗樟柳碱引起的乙酰胆碱含量的降低；细胞外生理研究证明，左旋黄皮酰胺可增强大鼠海马齿状回颗粒细胞层有低频刺激所诱发的群峰电位和由强刺激诱发的。这些结果表明，左旋黄皮酰胺有促智作用，有望开发成为抗老年痴呆病的新药。笔者通过文献报道的方法及黄皮酰胺的结构特点，确定了实验条件，建立了薄层扫描法(TLCS法)测定黄皮酰胺的含量，为控制黄皮酰胺的质量提供了实验依据。
1 仪器和材料
仪器：CS-9000型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；939薄层铺板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)；定量毛细管(美国Drummonp公司)。
材料：黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物及对照品均由中国医学科学院药理研究所提供。硅胶G(青岛海洋化工厂)，所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 对照品溶液及标准曲线的制备
精密称取黄皮酰胺对照品0.53mg，置5mLmL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为1.06mg／mL的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液5，l0，20，30，50μL，按层析条件点样，展开，扫描测定其峰面积，以点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=503.26 一42.2l，r=0.99l 9，线性范围为5.3～53μg／mL。
扫描条件及有关参数的确定：将对照品斑点在200～370nm波长范围内进行光谱扫描，其最大吸收波长为259 nm，确定测定波长λ=259nm。扫描方式：单波长反射法锯齿扫描，光源氘灯，线性参数为Sx=3，振幅为l0，背景校正。
2 2 样品溶液的制备
分别精密称取黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物1.02，1.02，1.06 mg，置10 mL量瓶中，分别加甲醇溶解，超声振荡30min，过滤，再加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。
2，3 层析条件及方法
取硅胶G(过240目筛)加0.5％CMC-Na(1：2.5)混合，研磨混匀超声除去气泡后，用自动铺板器铺板，规格10cm×20 cm，厚度为0.6mm。室温晾干，于105℃活化0.5h，置干燥器内备用。展开剂为置冰箱过夜的氯仿一甲醇(85：l5)的下层溶液，显色剂为碘化铋钾：碘-碘化钾(1：1)。
在同一薄层板上，分别点黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物样品溶液及黄皮酰胺对照品溶液各50μL，在上述层析条件下进行展开，展距为12.0cm，取出晾干，喷以显色剂，自然阴干，于可见光下观察结果，可见样品溶液在相同Rf=0.76处分别与对照品溶液均有相同的棕红色斑点。
2，4 样品含量测定
分别精密吸取黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物样品溶液各20μL，点于同一薄层板上，展开定位后测定其峰面积，按标准曲线计算。结果黄皮酰胺粗品含量为(34.70±l.79)％ ，一次甲醇提取物含量为(47.55±1.91)％ ，二次甲醇提取物含量为(83.28±2.61)％ 。
2 5 回收率试验
分别精密吸取已知含量的黄皮酰胺二次甲醇提取物溶液3份各20μL，点于同一薄层板上，同时分别精密加入对照品溶液l0，20，30μL，展开定位后扫描测定。
2．6 精密度试验
精密吸取对照品溶液20μL，点于薄层板上，展开定位后，连续扫描5次。结果各次测得峰面积的RSD为1.16％(n=5)。
2 7 稳定性试验
精密吸取对照品溶液20μL，点样，展开，定位，扫描测定峰面积，从15 min起测定，每隔30min测定1次，直至2h。结果对照品溶液在2h内基本稳定，RSD为1.7l％。
3 讨论
3 1 试验中采用薄层色谱法，所用展开剂系统是经过多次选择确定的，所展出的斑点基本无拖尾， 适当，稳定性好，利于扫描测定。
3 2 从方法的精密度和线性关系考察及加样回收试验的结果来看，样品在点样范围内，浓度与峰面积呈线性关系。TLCS法重现性、准确度好。