三黄片含量测定方法

三黄片处方为：大黄300g，盐酸小檗碱5g，黄芩浸膏21g（相当于黄芩苷15g）。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定大黄素和大黄酚的含量，现将其含量测定方法作一总结。
一、以大黄素和大黄酚为指标
2005《中国药典》三黄片含量测定项下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于 2000。
供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，精密称定，研细（过三号筛），精密称取适量（约相当于1片的重量），置锥形瓶中，精密加乙醇25ml，密塞，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸（10：1）混合溶液15ml，置水浴上加热回流1小时，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15ml，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2：1）混合溶液15ml溶解，移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
陈宁根等测定三黄片中大黄素、大黄酚的含量，采用HPLC法，Waters高效液相色谱仪。色谱柱为Bandpak C18柱（3.9mm×30mm）；柱温为室温；流动相为甲醇-0.1%高氯酸水溶液（78：22）；检测波长为254nm。
郭春燕等用反相高效液相色谱法测定三黄片中大黄素和大黄酚的含量。HP1100高效液相色谱仪；YWG- C18色谱柱(4.6mm×150mm ,粒度10μm)；流动相：甲醇-0.1 %磷酸溶液(90：10)；检测波长254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。样品处理同药典。
郑江萍等比较了不同三黄片中大黄素和大黄酚的总量，采用HPLC法，日本岛津LC-10A 液相色谱仪；Kromasil C18柱(4.6 mm×150mm)；色谱条件为2000版药典方法。
黄良永等用高效液相色谱法做了控制三黄片生产质量的研究，测定了大黄素和大黄酚的含量。采用日本岛津LC- 10AD 液相色谱仪；色谱柱为Kromasil C18 (4. 6 mm ×150 mm , 5μm ) 中科院大连物理化学研究所；流动相为甲醇- 0. 1%磷酸溶液(85：15)；流速1 m l/m in；检测波长254 nm ；柱温25℃。
徐韧柳等研究了三黄片质量标准，采用HPLC法测定了大黄素和大黄酚的含量。采用日本岛津LC-10AD液相色谱仪；色谱柱: 岛津Shim -Pack CLC-ODS柱, C18 5μm, 6.0mm×150mm；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(85：15)；流速1.0mL/min；检测波长430nm；柱温室温。
李明采用薄层扫描法测定三黄片中大黄素的含量，采用岛津CS-930薄层扫描仪。薄层条件：硅胶G板，展开剂为环己烷-乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（3：1：2：2：0.6）。扫描条件：发射法锯齿扫描，波长为445nm，狭缝1.20×1.20mm，Sx=3。

二、以大黄素、大黄酚和黄芩苷为指标
李淑盈等测定三黄片中大黄素、大黄酚及黄芩苷的含量，采用HPLC法，JASCO PU-1580 高效液相色谱仪。黄芩苷色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇-水-磷酸(47：53：0.2) 为流动相；测定波长为278nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。样品用甲醇超声处理。大黄素与大黄酚色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇- 0.1 %磷酸溶液(85：15) 为流动相，检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算，应不低于2000。样品乙醇加热回流，滤过，取续滤液水浴蒸干，加30 %乙醇-盐酸(10：1) 溶液置水浴上加热水解，立即冷却，用氯仿加强力振摇提取，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯(2：1)溶解并定容。

三、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等
蒋晔等非水反相液相色谱法测定三黄片中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。高效液相色谱仪: LC5500；色谱柱：Krom asil C18柱(250mm×4.6mm , 5μm )；柱温：室温；测定波长254 nm；体积流量：1.0 mL/m in；流动相：甲醇-冰醋酸(99.9：0.1)。在上述色谱条件下,理论板数以大黄酸计不低于4000、以大黄素计不低于13200、以大黄酚计不低于14500、以大黄素甲醚计不低于18600。
柳仁民等采用HPLC法测定三黄片中蒽醌类衍生物的含量（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）。采用Angilent HPLC仪；色谱柱为YWG C18反相柱(200mm×4.6mm,10μm,大连江申分离科学技术公司)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(90：10)；流速为1.0mL /min；检测波长为440nm,柱温为室温。样品处理：三黄片除去包衣,研细后用2.5mol/L硫酸溶液水浴加热回流,稍冷后加入氯仿继续回流，收集氯仿溶液,酸液再用氯仿30mL回流,每次合并氯仿液,蒸干,残渣加甲醇定容。