薄层扫描法测定侧柏叶中异海松酸的含量

摘要：目的：采用薄层扫描法测定侧柏叶中异海松酸的含量，并进行方法学研究。方法：色谱条件为硅胶G：氯仿-甲醇(100：0.5)；2%香草醛浓硫酸显色；检测波长560nm。结果：平均回收率97.7%，RSD=2.16%。结论：该法简便、灵敏、准确、重复性好，可用于侧柏叶及其制品的质量控制。
关键词：侧柏叶； 异海松酸； 薄层扫描法
侧柏叶为中医常用止血药，现代研究表明它对慢性支气管炎、肺结核也有较好疗效。从中分离出异海松酸(isopimaric acid)，具有抗结核活性以及镇痛、镇静等作用。笔者采用薄层扫描法测定侧柏叶中异海松酸的含量．作为药材及其制品的质量控制方法之一，为首次测定。
1 实验器材
异海松酸对照品(自制，紫外、红外、质谱、核磁与文献报道相同，纯度98.5%)；侧柏叶药材采自济南市燕子山，晾干．粉碎过4O目筛。备用。该药材经山东中医药大学徐凌川副教授鉴定为Platycladus orientalis(L．)Frano正品；实验用化学试剂均为分析纯。
CS-9301薄层扫描仪(岛津)；自动铺板器(重庆南岸科学仪器厂)；定量毛细管(美国Drummond)。
2 实验方法与结果
2．1 提取条件的选择 对不同溶剂提取效果进行考察，确定适合薄层扫描法的最佳提取方式。精密称取过4O目筛的侧柏叶粉末5.00g，加溶剂(5种)100ml，回流提取2h，过滤，再加溶剂100ml，回流提取1h，过滤，合并滤液，水浴蒸干，再用该溶剂转移至5ml量瓶中，定容，备用。用定量毛细管吸取2μl点于同一硅胶G板上，展开，显色，扫描。结果表明最佳提取溶剂为95%乙醇。
2．2 对照品溶液、供试品溶液的制备 精密称取异海松酸对照品1.8mg，置1ml容量瓶中，配成1.8mg／ml的氯仿溶液。为对照品溶液。精密称取过4O目筛的侧柏叶粉末5.00g：置烧瓶中，加100 ml 95%乙醇，置水浴锅上保持微沸2h．过滤．洗涤滤纸．残渣加100ml95%乙醇回流提取1h，同上操作，合并滤液，蒸干，再用95%乙醇转移至5ml量瓶中，定容。
2．3 层析条件与扫描条件 薄层板：硅胶G、0.3%羧甲基纤维素钠、1O%氢氧化钠水溶液(7：18：2)，机器铺板．厚度0.4mm；展开剂：氯仿-甲醇(100：0.5)；显色剂：2%香草醛浓硫酸，105℃烘箱显色10min。
吸收曲线：对异海松酸斑点在350nm到700nm 分两段进行光谱扫描，结果确定测定波长=560nm，参比波长=660nm，X=13mm，Y=15mm，SX=3，狭缝0.4mm×0.4mm。
显色稳定性：显色后覆盖玻璃板避光放置，在0～6Omin，每隔10min扫描同一斑点1次，峰面积积分值统计RSD=1.28%．表明1h以内测定稳定。
2．4 标准曲线 用定量毛细管精密吸取异海松酸对照品液1，2，3，4，5μl(1.8，3.6，5.4，7.2，9.0μg)，点样，按上述条件展开，显色，扫描，测得其峰面积积分值1378.049，2858.045，4446.606，5 634.761，7 091.1O6。计算回归方程得Y=790.7X+9.9349，r=0.9990，表明浓度值在1.8～9.0μg范围内与峰面积积分值线性
关系良好。
2．5 精密度与重现性 同一点样量板内5点峰面积积分值3535.278，3489.678，345O.O41，3536.842，3619.678。RSD=1.797%；板间5点含量测得值4.21，4.18，4.11，4.29，4.36，单位μg／2μl，RSD=2.298％。
2．6 加样回收率试验 精密称取已测得异海松酸含量的供试品，加人一定量的异海松酸对照品，按提取、层析、扫描条件，测得含量，计算回收率。
2．7 测定结果 将供试品液、对照品液点于同一薄层板上，按测定条件扫描测定。
3 小结
3．1 异海松酸易溶于***、氯仿、沸乙醇，溶于甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯。而在提取工艺上本法所用95%乙醇提取效果最好，氯仿等效果较差，可能是因为应用薄层扫描法时，95%乙醇提取分离效果好，而氯仿等脂溶性成分溶出较多，分离效果差造成的。所以就薄层扫描法而言，用95%乙醇提取所测得的异海松酸含量最高。
3．2 显色剂的选择上，经比较显色外观、稳定性、上机测试背景杂质等情况，得出2%香草酸浓硫酸效果较好。通常不用显色剂效果应更好，但鉴于应用薄层扫描法时，所测斑点附近有一杂质斑点，有时能与所测斑点重叠而不被发现，无法提前确定薄层板分离效果。显色后，两斑点色泽差异明显，杂质斑点是否与所测斑点重合可及时发现，扫描测定更直观可靠。虽然不显色可提高精密度，但降低了对准确度的把握。所以综合比较，显色后测定较好。