金银花含量测定方法(绿原酸、木犀草苷)

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb. 的干燥花蕾或带初开的花。2005中国药典以绿原酸和木犀草苷为对照，采用高效液相色谱法测定其含量。
一、 高效液相色谱法
⑴2005版中国药典金银花含量测定项下：
绿原酸含量测定：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于1000。
供试品溶液的制备：取本品粉末（过4号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35KHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
木犀草苷含量测定：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.5%冰醋酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为350nm。理论板数按木犀草苷峰计算应不得低于2000。
0～30分钟，流动相A10%→30%，流动相B90%→70%
供试品溶液的制备：取本品粉末（过4号筛）约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35KHz）1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过,取续滤液，即得。

⑵文献报道的HPLC法
HPLC法测定金银花及其制剂中绿原酸的含量时，文献报道的色谱条件，常用的流动相为乙腈-磷酸溶液、甲醇-1%冰醋酸等。如：
毛泉明等采用HPLC法测定银翘解毒片中绿原酸的含量。美国Warers高效液相色谱仪；481可变波长紫外检测器；730数据处理器；色谱柱：μ-Bondapar C18(3.9×300mm，lOμm)；流动相：甲醇-1%冰醋酸(27：73)；流速：O.8mL／min；检测波长：329nm；灵敏度：0.1AUFS；纸速：0.2cm／min；室温25℃；数据处理方法为外标峰面积法。
杨义芳等RP-HPLC法测定胖大海口含片中绿原酸和甘草酸含量。201型液相色谱仪(日本Waters公司)；色谱柱YWG C18(300mm×4mm，粒径10μm)；流动相绿原酸用甲醇-1％醋酸(23：77)；检测波长326nm；流速0.9mL／min；定量方法用外标一点法。
张忠春等HPLC法测定金银花中绿原酸的含量。SP-8800高效液相色谱仪；SP-200型UV检测器；色谱柱：Sphersorb C18（10μ，4.6mm×250mm）流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13：87)；流速1ml/min，检铡波长326nm；柱温30℃。
另外还有用其他条件的，如：熊英等用反相高效液相色谱法测定清解颗粒及金银花中绿原酸含量。采用岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，SCL-10 A系统控制器，C-R7A数据处理机，DGU-4A脱气机；色谱柱：岛津CLC-ODS 6.0×150mm(5μm)；流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(15：85：0.7：0.15)；流速：1.0mL／min；检测波长：326nm；柱温：室温。胡丽君等测定金银花及其制剂中绿原酸的含量时采用的也是此方法。
张丹等采用HPLC法测定金银花、茵陈及其1O种中成药中绿原酸的含量。日本岛津LC-3A液相色谱仪；SPD-1型紫外检测器；分析柱：Shimpack ODS(150mm×6mm)；预柱：YWG C18(30mm×4.6mm)；流动相：0.2mol／L NaH2PO4-甲醇(75：25,H3PO4调pH3.2)；流速：1.Oml／min；柱温：35℃；检测波长：327nm。