红景天含量测定方法(红景天苷)

ainuo 网络 2015-12-24 12:08:00

红景天为景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et.Thoms.)H.Ohba的干燥根及根茎。2005版《中国药典》采用高效液相色谱法测定其红景天苷的含量。文献报道的红景天及其制剂的含量测定方法主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法、薄层扫描法等。现将文献报道过的实验方法作一综述
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》红景天含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(15:85)为流动相,检测波长为275nm.理论板数按红景天苷峰计算应不低于6000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约0.5克,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10ml,密塞,摇匀,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
常用的HPLC条件及供试品溶液的制备方法总结如下。
色谱仪:①美国Waters 高效液相色谱仪,600泵,DAD996 检测器,Millennium322010 版色谱工作站;②Hi-tech (美国) 高效液相色谱仪,Hi2tech500UV/vis 检测器,SSIP4000 泵;③岛津LC24A高效液相色谱仪、岛津SPD22AS紫外检测器(岛津制作所);④SP-8800 型高效液相色谱仪,SP-200 型紫外检测仪;⑤HP1100 型系列高效液相色谱仪;⑥岛津LC-10Atvp 高效液相色谱仪;
⑦PE1022/200高效液相色谱仪;等等。
色谱条件:①色谱柱:Bondclone C18 ( 10μm, 3.9 mm×300mm);流动相:水-甲醇-乙腈(80:20:5);流速:0.6mL/ min;检测波长:223nm。②色谱柱 phenomenex ODS 柱(5μm,250nm×4.6mm ID);流动相:甲醇-水(17:83);流速1.0ml/ min;柱温:室温;检测波长223nm;③色谱柱:YWG-C18 (大连化学物理研究所,4.6×250mm,10μm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(20:80:1);检测波长:225nm;流速:1.0ml/min;纸速: 0.1mm/min;柱温:室温;④Discovery C18 色谱柱(250×4.6mmi. d.,5μm);流动相为20mmol/L磷酸盐溶液(pH3.0)-乙腈(93:7),流速1.0mL/min;检测波长223nm;柱温20℃;⑤Diamonsil C18 色谱柱(4.6mm×15cm), 柱温40℃,流动相:甲醇-水-磷酸(11:89:0.04);检测波长:275nm;等等。
供试品溶液的制备方法:甲醇溶液浸渍或回流提取;甲醇提取后,过氧化铝柱,70%乙醇洗脱等等。

二、薄层-紫外分光光度法
采用薄层-紫外分光光度法测定红景天苷的含量时,常用的展开剂为氯仿-甲醇-水,固定相为硅胶GF254。如:安丰等采用薄层-紫外法测定八种红景天属植物中红景天甙的含量。使用岛津UV2260 型紫外分光光度仪;薄层层析用硅胶GF254,4%CMC-Na常法铺板,105℃活化30min;展开剂为氯仿-甲醇-水(26:14:3);测定吸收波长为223.8nm。谢乾松等测定塞北红景天中红景天甙含量时也采用薄层-紫外法,使用岛津UV 2201 紫外分光光度仪。样品的均以甲醇为提取溶剂。

三、薄层扫描法
钱彦丛等采用薄层扫描法测定冀产红景天中红景天苷的含量。CS-9000 型薄层扫描仪(日本岛津);硅胶G版;展开剂:氯仿-甲醇-丙酮-水(6:3:1:1);显色方法:用碘蒸气熏2~3min;λS = 226nm,λR=350nm,反射法锯齿扫描,狭缝1.25mm×1.25mm,SX=3。药材用甲醇回留提取。实验中薄层控制温度在25℃,湿度65%

四、毛细管电泳法和气相色谱法等
王洪伦等利用毛细管电泳法分离测定两种红景天中红景天甙和酪醇的含量,所用毛细管规格为48.5cm×50μm,二极管阵列紫外检测器(DAD) 检测波长221nm,最佳分离条件:电压21 kV,分离温度25℃,背景电解质为含有30mmol/ L十二烷基硫酸钠(SDS),2.5 + 97.5 ( V/ V) 乙腈的14mmol/ L 硼酸溶液,pH 10.7。红景天甙与酪醇分别在60.0~7.5μg/ mL 和27.5~3. 5μg/ mL 质量浓度范围内与电泳峰面积呈现良好线性关系,检测下限分别为3.0和1. 5μg/ mL。对标准品进行6次测定,迁移时间的RSD为0.25%和0.39%,峰面积的RSD为5.26%和3.52 %。
康胜利等采用硅醚化方法,用甘露醇丙酰化物作内标物,建立了红景天植物药材中红景天甙和百脉根甙的气相测定方法。硅醚化试剂为六甲基二硅胺烷-三甲基氯硅烷(2:1)。色谱条件:OV-101不锈钢毛细管柱( 45m×0.25mm),程序升温200℃~245℃(5℃/ min),载气N2,柱前压196 kPa,流速55ml/ min (分流比30:1),尾吹30ml/ min,进样室温度285℃,FID。量程10,衰减64。药材用甲醇提取。
张群等采用重氮化比色法测定红景天苷含量。采用铅盐沉淀法和氧化铝吸附法对流浸膏液净化提纯,最大吸收波长491±2nm。重氮化试剂的配制(需新鲜配制):甲液:磺乙酰胺钠3.5g,置于50ml容量瓶中,加盐酸溶液(1→10) 稀释至刻度;乙液:亚硝酸钠5g 加水至50ml;应用时,甲、乙两液取等量在冰水浴中混合, 放置片刻使用。

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