薄层扫描法测定健脾开胃颗粒剂中人参皂苷Rg1、Re的含量

摘要：目的制定健脾开胃颗粒剂的内在控制质量标准。方法：Rg1以氯仿-甲醇-水(25：10：1)为展开剂，Re以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10℃下放置下层液为展开剂；10％硫酸乙醇为显色剂，以硅胶G为吸附剂，Rg1：(入s=535nm，入R=660nm)，Re：(入s=525nm， 入R=700nm)双波长薄层扫描法测定健脾开胃颗粒剂中人参皂苷Rg1、Re的含量。结果线性方程：Rg1：Y=7688.9x+5173.4(r=0.9983)：ReY=9699.3x+14.494(r=0.9977)平均回收率：Rg。：95.56％，Re：98.79％；精密度：RSD Rg1：0.85、0.23(n=5)。结论该法简便、快速，可作为该制剂的质量控制指标之一。
关键词：人参皂苷；健脾开胃颗粒剂；双波长薄层扫描；含量测定
健脾开胃颗粒剂为一经验方，由人参、白术、茯苓、山药、山楂、神曲、陈皮、甘草等中药组成，其中人参为70％乙醇浸泡，陈皮和白术提挥发油后再与其余药水提取所得。具有健脾开胃之功效。人参为方中君药，又是贵重药，故以其作为含量测定对象。人参中主含的人参皂苷为其主要有效成分，因而选用人参皂苷Rg 、Re为测定指标，采用薄层扫描法测定其含量。前者采用氯仿-甲醇-水、后者采用正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水为展开系统，使薄层斑点分离效果优于其他常用展开系统。
1 仪器、试剂与样品
双波长薄层扫描分析仪(CS-930型，日本岛津)；分析天平(DT-100A)；微量进样器(上海微量注射器厂)。人参皂甙Rg1、Re(供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；健脾开胃颗粒剂(自制)；其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2．1标准品溶液的制各精密称取人参皂甙Rg1、Re对照品2.0902mg、2.2000mg，加甲醇定容至2ml制成浓度分别为1.045mg／ml、1.1000mg／ml的溶液，备用。
2．2供试品溶液的制备 取健脾开胃颗粒，精密称定3.1000g、5.1108g分别加70％乙醇溶液35ml、60ml回流提取1h，滤过，药渣与滤器用70％乙醇溶液洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加水20M 使溶解，转移至分液漏斗中，用***提取2次，弃去***液，水液用水饱和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的0.01mmol／L氢氧化钠的溶液洗涤2次，再用正丁醇饱和的水洗涤，碱液与水液合并，用水饱和的正丁醇提取2次，合并前后2次正丁醇液，置蒸发皿中蒸干，分别用甲醇定容至5ml，即得。
2．3薄层扫描条件均采用高效硅胶G薄层板，展开剂前者用氯仿-甲醇-水(25：10：1)，后者用正丁醇-乙醇乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10℃下放置的下层液；显色剂均为1O％硫酸乙醇，喷后105℃加热约5mim采用反射法锯齿扫描，扫描波长为：Rg1(入s=535nm， 入R=660nm)，Re(入s=525nm．入R=700nm)。
2．4 线性关系考察 分别精密吸取Rg1标准品溶液(1.045lmg／m1)1，2，3，4，5u l；Re标准品溶液(1.000mg／m1)1，2，3，4，5，6u1分别点于两块硅胶G薄层板上，展开并显色；扫描.
以上样量(u g)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，其回归方程为Rg1：y=7688.9x+5173.4，相关系数：r=0.9983；Re：y=9699.3x+14.494，相关系数r=0.9977。
结果表明，人参皂甙Rg1在1.045～5.2205 u g、人参皂甙Re在1.1000～6.6000u g范围线性关系良好。
2．5稳定性实验吸取对照品溶液2u l，点于薄层板上，于显色后每隔30min扫描一次，结果表明峰面积在2.Oh内稳定.
2．6精密度实验 同板精密度，取同一供试品溶液，在同一薄层板上点5个5 u l点，展开并显色后进行扫描.
2．7样品含量测定取健脾开胃颗粒剂5批，同前提取、展开，各进样lOul，人参皂苷Rg1与Re各进样2、4 u l，依法测定，
2．8阴性干扰实验 取缺人参药方，按供试品的制备方法制备成阴性溶液，与样品液、Rg1标准品溶液点于同一薄层板上，展开，结果阴性液在Rg 斑点处无斑点，证明阴性无干扰.
2．9 回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品1.6082g， 分别精密加入人参皂甙Rg1标准品溶液(0.3392mg／m1)与Re(0.3772mg／m1)各5ml，依法测定.
3 讨论
①展开剂的选择Rg1曾采用正丁醇-冰醋酸-水(8：1：1)下层液，但斑点分离效果不明显，干扰色斑相隔太近，而且展开时间较长，又曾试用氯仿-正丁醇-甲醇-水(20：4O：15：10)，氯仿-甲醇-水(65：35：5)等展开剂效果均不佳。只有用氯仿-甲醇-水(25：10：1)系统，使人参皂苷Rg1其他皂苷成分分离，效果最佳，Re采用正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10℃下放置下层液为展开剂，可达理想的分离效果，且对环境温度及湿度无特别严格要求，操作简单。②显色剂 采用1O％硫酸乙醇喷雾显色，曾试用10％硫酸乙醇浸泡显色，该法操作较复杂，显色剂量大，不好把握浸泡时间，故改为喷雾显色。③薄板选用20 X 20板，展开前将薄板各刮去两角约1.5cm的硅胶，可减少前沿效应，并在展开前饱和30min，可减少斑点的脱尾现象。④ 本品化学成分复杂，分别以0.1mmol／L氢氧化钠-正丁醇饱和溶液的水层和水-正丁醇饱和浓度水层洗涤正丁醇提取液3次x 20ml，可有效除去杂质，使薄层色谱Rg1斑点清晰，重现性好，色带干扰小。