关黄柏为芸香科植物黄檗Phellodendron amurense Rupr.的干燥树皮。2005版《中国药典》以盐酸小檗碱为指标，采用高效液相色谱法测定其含量。盐酸小檗碱的含量测定方法文献报道较多，主要有高效液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法等。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》关黄柏含量测定项下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50）（每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）为流动相，检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.5克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
文献报道的用HPLC测定盐酸小檗碱的含量时，常用的流动相系统为乙腈-磷酸溶液（磷酸二氢钾或磷酸二氢钠等）。现举两例。
张煊等测定关黄柏不同采收期及黄檗不同部位的小檗碱、巴马汀含量。岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪；检测器：岛津SP-10Avp，配ANASTAR工作站；色谱柱：Diamonsil ODS 柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-磷酸二氢钠-SDS(体积比42：58：0.01)；检测波长：345nm；流速：1.0mI/min；柱温：30℃。供试品溶液的制备：精密称取关黄柏药材粉末(过三号筛)0.2000g置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸(φ=0.01)甲醇溶液50mI，密塞并称重。冷浸10min后，超声提取30min，放冷，补足甲醇至恒重，摇匀。取干燥滤纸过滤并取续滤液10mI，蒸干，残渣用***脱脂后转移置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即为供试品溶液。
谭生建等用HPLC法测定黄柏石膏散中盐酸小檗碱含量。高效液相色谱仪：含2800液相色谱泵，7215型手动进样器，紫外光检测器(美国BIO―RAD公司)，TL9900色谱数据工作站(北京泰乐公司)。Intersil C18分析色谱柱(4.6mm ID×250mm，粒径5μm)；流动相：水-乙腈(69：31，含0.5％三乙胺，磷酸调pH3.0)；检测波长350nm；流速：1mL/min。盐酸小檗碱保留时间约为12.9min，与相邻峰的分离度大于1.5，理论板数56O0。供试品溶液制备：取黄柏石膏散1.5g(约相当黄柏1g)，置磨口烧瓶中，加乙醇90ml，水浴回流60min，放冷至室温，滤过至lOOml量瓶中。滤渣用乙醇洗滤，洗滤液收集于同一量瓶内，加乙醇至刻度，摇匀，取少量用微孔滤膜滤过，即得。
二、薄层扫描法
采用薄层扫描法测定盐酸小檗碱含量时，常用的展开剂系统为苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水，单波长扫描常选择测定波长为366nm（345nm），供试品溶液制备方法各异，现举例说明。
李季媛采用薄层扫描法测定白头翁止痢片黄柏中盐酸小檗碱含量。瑞士卡玛TLC SCANNER3薄层扫描仪；测定波长340nm，参比波长205nm；展开剂：苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)；氨蒸气预饱和；测定波长340nm，参比波长205nm。供试品溶液的制备：取本品，除去糖衣，研细，取5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加盐酸甲醇(1：100)50mL，称重，超声提取20min，放置室温，称重，用盐酸甲醇(1：100)补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。
郑志伟采用双波长薄层扫描法测定尿塞通片中盐酸小檗碱的含量。CS-9301薄层扫描仪，日本岛津；展开剂：正丁醇-冰醋酸-水(7：1：2)；测定波长为425nm。供试品溶液制备：取本品1O片，除去糖衣，精密称定，研细，取约1.5g，精密称定，置索氏提取器中，用***提取3h，弃去***液，药渣挥尽***，加乙醇适量，回流提取至提取液近无色， 提取液蒸干，用少量甲醇溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，挥去溶剂，使成松散状，全部转移至中性氧化铝柱上(5g，内径1cm，干法装柱)，用无水乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，至干，残渣加10ml／L盐酸甲醇使溶解，定量移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
供试品溶液的制方法举例：
①常用提取溶剂为盐酸-甲醇，具体的有：取本品（倍连软膏、牛黄醒脑丸等）*g，精密称定，加***(具体改变，50，50，40，40ml)超声提取(具体改变20，20，15，15 min)4次，离心(1000～2000r/min)，弃去上清液，残渣挥干***，置100ml量瓶中，加入盐酸-甲醇(1：100)约95ml，60℃水浴中加热15min，取出，加热超声处理30min，室温放置过夜，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。
②取本品（舒心冲剂）5袋，研细，取粉末约lOg，精密称定，加水25mL，超声3～5min，用浓氨试液调pH值9～10，用氯仿提取5次(30、30、30、20、20mL)合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
三、分光光度法
薛慧清采用分光光度法测定康尔乐洗剂中小檗碱类的含量。UV-265型紫外分光光度计(日本岛津公司)；Vis-7220型分光光度计(北京瑞利公司)；测定波长426nm。样品溶液的制备：取康尔乐洗剂1.5g，精密称定，加水10mL稀释并转移于分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取5次，每次10mL，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，残留物加无水乙醇2～3mL溶解，上至 03柱(100～140目，5g，内径约1.5cm)，再用无水乙醇洗脱，小檗碱类的成分黄色带很快洗下，收集洗液约8 mL于10mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，制得样品溶液。
四、比色法
龙小华等采用三元络合物比色法测定复方苦参洗剂中小檗碱的含量。UV-2102PCS紫外分光光度计(上海尤尼柯)。小檗碱在pH6.7的溶液中，与溴酚蓝、奎宁形成三元络合物比色，经氯仿提取，在610nm波长处测定吸收度。
五、其它方法
孔玲等采用同多钼酸根共振瑞利散射光谱法测定盐酸小檗碱片中盐酸小檗碱的含量。实验方法：取1×10-3mol／L钼酸铵溶液1.5mL于10 mL比色管中，加入pH3.45的HCl-NaAc缓冲溶液4mL，再加入一定量的2×10-5mol／L的盐酸小檗碱，放置10min后，用水稀释至刻度并摇匀，将溶液于荧光分光光度计上以λem=λex(即Δλ=0)方式进行同步扫描，可得共振瑞利散射光谱，然后于λem=λex处测定产物溶液的散射光强度I和试剂空白的散射强度I0，ΔI=I- I0。
张雪云等采用剩余滴淀法、分光光度法与高效液相色谱法测定盐酸小檗碱片的含量。结果：根据上述三种盐酸小檗碱片含量测定方法得知，剩余滴定法不能真正地反映出盐酸小檗碱含量的高低，滴淀操作误差大，专属性差，而且凡是能与重铬酸钾起反应的药物都可以影响盐酸小檗碱的含量测定；分光光度法与高效液相色谱法两者都能真正地反映出盐酸小檗碱的含量，两者测定结果基本一致。但分光光度法操作较高效液相色谱法简单，而高效液相色谱法较分光光度法更灵敏，因此认为高效液相色谱法专属性强、灵敏度高，结果准确可靠，测定结果不受其它成分的影响，可作为盐酸小檗碱片的含量测定。
剩余滴淀法：取样品（盐酸小檗碱片）20片，如有糖衣，应除去糖衣，精密称定，研细，精取适量(约相当于盐酸小檗碱0．3g)置烧怀中，加沸水150ml，搅拌使盐酸小檗碱溶解，放冷，移入一250ml量瓶中，精加重铬酸钾滴淀液(0．O1667mol／L)50ml，加水至刻度，振摇5分钟，用于燥滤纸过滤，精取续滤液lOOml置250ml具塞锥形瓶中，加碘化钾2g，振摇使溶解，加盐酸溶液(12)lOml密塞，摇匀，在暗外放置l0分钟，用硫代硫酸钠滴淀液(0．1mol／L)滴淀，至近终点时，加入定粉指示液2ml，继续滴淀至蓝色消失，溶液显亮绿色。并将滴淀结果用空白试验校正。
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