摘要:采用苯酚-硫酸比色法测定不同产地狗脊及狗脊炮炙品中多糖的含量，并对多糖进行高效毛细管电泳指纹图谱分析。
关键词:狗脊;多糖;高效毛细管电泳;指纹图谱
中药狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L)J．Sm．的干燥根茎，为常用中药，历版中国药典均有收载。多糖是其重要的活性成分，我们在对狗脊的根进行系统化学成分研究中，提取分离了其多糖部分并测定了其含量，并用高效毛细管电泳构建其指纹图谱，现报道如下。
1 材料与仪器
1．1 材料供试药材均经笔者鉴定，凭证标本存放于第一军医大学南方医院药学部植化室。
1．2 仪器与电泳条件UV-265FW紫外分光光度计(日本岛津)；沙多利士R200D型电子天平(德国)；美国BIO-RAD公司BioFocus TM3000型Capillary Ion Analyzer，配有紫外扫描检测器。熔融石英毛细管75μm×60cm(河北永年光纤厂)。电解缓冲液为300mmol／L硼酸盐溶液(pH8.5)；电压为20kV；温度20℃；紫外检测波长260nm；重力进样，时间5s。开机后先用0.1moL／L氢氧化钠冲洗毛细管2min，再用去离子水冲洗5min，然后用缓冲液冲洗至基线平稳后开始进样。每两次进样之间设定缓冲液冲洗2min。
1．3 试剂无水葡萄糖对照品(AR)，苯酚(AR)，浓硫酸(AR)，所用试剂均为分析纯。
2 方法
2．1 狗脊多糖的提取与精制 取狗脊适量，60℃烘干，粉碎，过20目筛。称取100g置1000ml圆底烧瓶中，加80％乙醇9OOml，浸泡过夜，90℃回流1h，趁热过滤。滤渣加入800ml水，浸泡1h，90℃温浸1h，滤过，药渣加水400ml，90℃温浸30 min，滤过，合并滤液，减压浓缩至100ml，用氯仿萃取3次，水液加1％活性炭脱色2次，抽滤，滤液加85％乙醇使醇含量达80％，4℃以下放置过夜。滤过，残渣先后用85％乙醇，无水乙醇和丙酮依次洗涤3次，样品置真空干燥器中干燥，得精制狗脊多糖。
2．2 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖28.5mg，加水溶解并定量至100ml。
2．3 标准曲线的绘制 分别吸取对照品溶液1.0ml、3.0 ml、5.0ml、7.0ml、9.0ml、11.0ml和13.0ml，置于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，各精密吸取2.0ml于具塞试管中，加入1.0ml 5％苯酚溶液，再垂直加入5.0ml浓硫酸，静置5min，振摇，置沸水中保温15min，冷却，在490nm波长处测吸收度，以葡萄糖量为横坐标(X)，吸收度为纵坐标(Y)，绘工作曲线。得回归方程：Y=36.3388×0.001X +1.1645×0.001，r=0.9944(n=3)，线性范围为：1～l0μg/ml。
2．4 换算因子的测定精密称取多糖23.0 mg，溶解并稀释至100ml，摇匀，吸取2.0ml，加入1.0ml苯酚溶液，再垂直加入5.0ml浓硫酸，静置5min，振摇，置沸水中保温15min，冷却，在490nm波长处测吸收度，重复4次。另精密称定一份对照品0.2g，用蒸馏水稀释至100ml，量取2ml再稀释至100ml，测定其吸收度。用外标法计算其葡萄糖含量。按下式计算多糖换算因子：J=W／C×D(式中：W为实际多糖量，C为供试液中葡萄糖量，D为稀释因子)。求得J为l3.95×0.001。
2．5 样品测定精密称取不同产地狗脊粉末100mg，于100ml平底烧瓶中加入80％乙醇50ml，回流1h，趁热过滤，滤渣以80％乙醇洗涤3次，每次20ml。药渣置平底烧瓶中，加蒸馏水50ml，回流1h过滤，用蒸馏水洗涤4次，每次5ml，转移滤液于100ml容量瓶中，冷却后定容。精密吸取2.0ml，置具塞试管中，按标准曲线项下同法操作，测吸收度，用外标法计算多糖含量。
2．6 样品液HPCE测定按1．2所述电泳条件进行测定。
3 结果
3．1 狗脊多糖含量见表，多糖加样回收率为98.3％，RSD=2.31％(n=5)。
3．2 不同产地狗脊所含多糖的HPCE图谱基本一致，从图中可看出，狗脊主要含两种多糖，其迁移时间分别在l0.45 min和l0.95 min左右，平均相对含量分别为32.58％和48.08％，RSD<3.0％(n=5)。但经炮炙后的药材多糖成分和相对含量有明显改变，以上两种多糖仍存在，但平均相对含量分别为23.98％和31.25％，RSD<3.0％(n=5)。另外还有一些肩峰和小峰出现，其中迁移时间在l3.49min的峰较大，平均相对含量为6.96％，RSD<3.0％(n=5)。
4 讨论
有文献提及狗脊含淀粉约30％，但未见狗脊多糖含量的报道。本文首次对不同产地的狗脊多糖进行了测定，发现多糖含量高低相差较大，其中云南狗脊多糖含量较高，而炮炙药材多糖含量较低，相差约3倍。
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