目的:分析进口索马里乳香与埃塞俄比亚乳香挥发油的化学成分,并建立其相应主成分的含量测定方法。方法:GC-MS联用鉴定乳香挥发油成分;GC法进行含量测定,SE-54填充柱(2.1m×3.2mm),柱温为程序升温,初始温度80℃ ,保持lmin,终止温度170℃,每分钟升温l5℃。结果:分别鉴定了索马里乳香挥发油柏种成分与埃塞俄比亚乳香挥发油22种成分,其中索马里乳香挥发油主成分为α-蒎烯.埃塞俄比亚乳香挥发油主成分为乙酸辛醋;对17批次不同样品进行了测定,α-蒎烯线性范围0~10.8Oμg,r=0.9995,加样回收率为98.16%,RSD1.83%;乙酸辛醋线性范围为0~l0.32μg,r=0.9996,加样回收率为99.56%,RSD1.36%。结论:通过本项研究,为乳香进口药材质量标准的制订奠定基础。
索马里乳香;埃塞俄比亚乳香;α-蒎烯;乙酸辛酯;气相色谱法
乳香为进口药材,为橄榄科植物乳香树Bosumellia carterii Birdw.及同属植物B.bhawdijian Birdw.树皮渗出的或经刀割渗出的树脂,具有活血止痛、外用消肿生肌的功效,为常用中药。主产于索马里和埃塞俄比亚,苏丹、南阿拉伯地区亦有出产,目前也有从肯尼亚进口的药材。对索马里乳香挥发油成分有报道,但仅鉴定了其中20余种成分,而有关乳香的鉴别及含量测定的方法未见报道。由于乳香产地范围广,基源植物不易考证,而我国每年需花费大量外汇购买乳香,为能更好地控制药材的质量,本文采用气相色谱.质谱联用分析了两种乳香挥发油成分.并建立了气相色谱填充柱法测定乳香挥发油主成分a-蒎烯、乙酸辛酯的含量。
1 仪器与试药
索马里乳香、埃塞俄比亚乳香(由天津市药品检验所、北京市药品检验所提供)。
α-蒎烯、乙酸辛酯对照品(由我所提供)。所用试剂均为分析纯。
Pye204型气相色谱仪,MM70-70H质谱仪;岛津GC-14A气相色谱仪。
2 测试条件
2 l 0DMS条件
SE-54毛细管色谱柱(30m×0.32mm),柱升温程序:初始温度5O℃,以4℃/min。升至210℃ ,气化室温度230℃;载气氮气,柱前压500kPa;分流比1:30;分辨率60O,电离方式El,电离电压70eV,加速电压4kv,离子源温度200℃,扫描范围20~350amu,扫描速度1s/dec。
2 2 GC条件
GC-14A气相色谱仪,载气氮气,SE-54色谱柱(2.1m×3.2mm),涂布浓度10%,柱升温:初始温度8O℃ ,保持1min,以15℃/min升至200℃,保持10min,气化温度240℃。
3 供试品溶液的制备
称取粉碎成粗粉的药材20g,精密称定,按2000年版《中国药典》一部附录挥发油测定法(甲法)分别提取挥发油,作为供试品溶液A1,A2。
取供试品溶液A1,A2各50mg,精密称定,置5mL量瓶中加无水乙醇溶解并稀释至刻度,作为供试品溶液B1,B2。
4 GC-MS测定方法及结果
取供试液1,采用GC-MC联用方法,依条件测定,所测质谱图与标准图谱对照,索马里乳香挥发油主成分为α-蒎烯,埃塞俄比亚乳香挥发油主成分为乙酸辛酯。
5 乳香主成分含量测定方法与结果
5.1 线性关系
分别取α-蒎烯、乙酸辛酯对照品适量,精密称定,分别以无水乙醇溶解制成54.0mg/mL及51.6mg/mL 的2种溶液,作为对照品储备液。再分别精密吸取2种储备液0,0.4.0.8,1.6,2.0mL,各置1OmL量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,分别制得α-蒎烯与乙酸辛酯对照品梯度溶液。取上述各溶液,进样1μL,分别计算回归方程。
α-蒎烯回归方程为:Y=4447.84X 一94.9,r=0.9995;在0~10.8Oμg内呈线性关系。
乙酸辛酯回归方程为:Y=6204.45X +658.78,r=0.9996;在O~lO.32μg内呈线性关系。
5.2 精密度试验
分别各取处理后的同一批索马里乳香与埃塞俄比亚乳香,连续进样测定6次,以样品峰面积积分值计算,RSD为1.28%和1.06%。
5.3 重现性试验
分别各取一批索马里乳香与埃塞俄比亚乳香.按供试品溶液制备及样品测定方法分别测定5次.RSD为1.87%和2.26%
5.4 回收率试验
取已知含量的同一批样品,分别精密加入一定量的α-蒎烯、乙酸辛酯对照品,按样品测定方法试验,所测回收率结果。
5.5 测定结果
分别精密称取α-蒎烯、乙酸辛酯对照品50mg置10mL量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度.作为含量测定用对照品溶液。分别取上述对照品溶液各1μL、索马里乳香及埃塞俄比亚乳香供试品溶液B1,B2(见供试品溶液制备)各2μL,注入气相色谱仪,依条件测定,计算含量。索马里乳香挥发油中a-蒎烯含量分别为26.30%,27.19%。
6 讨论
6.1 我国药用乳香主要来自非洲,多由索马里进口,索马里是世界上最有名的乳香产地.不仅产量大且挥发油含量高,其所产乳香据认为是乳香中的上品,但由于索马里内战,近年进口的乳香多出自埃塞俄比亚;亦有从肯尼亚进口的乳香,其挥发油气相色谱图与埃塞俄比亚乳香相近.但基原植物是否相同,尚难以考证。
6.2 通过对5种气相色谱填充柱(3%OV-17,1O%PEG-2OM,5% SE-30,10%SE-54和5%XF-1105)的筛选,SE-54柱适用于不同的乳香挥发油的测定,既可用于不同乳香的鉴别.又可用于相应的含量测定,该法分离效果好,专属性强。
6.3 对索马里乳香与埃塞俄比亚乳香挥发油主要成分的分析表明,两种乳香虽在中药中都作同一种药材用,但挥发油主成分不同,挥发油所含化学成分亦不尽相同。可为两种乳香其它研究提供参考。
6.4 通过对索马里乳香与埃塞俄比亚乳香挥发油主要成分的分析,为建立有效的鉴别及定量方法、制订相应的质量标准提供依据,对于保证进口乳香的质量十分必要。
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