反相高效液相色谱法测定胃舒颗粒中橙皮苷的含量

　　目的：建立以反相高效液相色谱法测定胃舒颗粒中橙皮苷含量的方法。方法：色谱柱为SymmetryC18柱；流动相为乙腈-水(19.5：80.5)，水中含磷酸(体积比为800：0.1)；检测波长为284nm。结果：橙皮苷进样量在0.0228μg～0.1596μg范围内线性关系良好(r=0.9996)，平均加样回收率为97.2％(RSD=1.1％，n=6)。结论：本方法简便、准确，可用于控制胃舒颗粒的质量。
关键词：相高效液相色谱法；胃舒颗粒；橙皮苷；含量测定
Determination of the Content of Hesperidin in Weisu Granules by RP-HPLC
QIAN Yan，Zhao Chunjing
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a RP-HPLC method for determination of the content of hesperidin in weisu granules．METHODS：Symmetry Cl8(150mm×3.9mm，5μm)column；acetonitrile-water(19.5：80.5)，water containing phosphoric acid(800：0.1)as mobile phase and detection wavelength was 284nm．RESULTS：The calibration curve was linear in sample size range of hesperidin of 0.0 228μg～0.1596μg(r=0.9 996)．The average recovery was 97.2％(RSD=.1％，n=6)．CONCLUSI0N ：The method was simple and accurate。and can be used for quality control of weisu granules．
KEY WORDS RP-HPLC；Weisu granules：Hesperidin：Content determination
胃舒颗粒是由青皮、苍术、香附、太子参、黄连等中药组成的复方制剂，具有健脾、理气、和中的功效，临床上用于治疗“睥虚气滞食积”所致的脘腹痞满、呕吐反胃、嗳气、纳呆、泛酸等症状，效果显著。其中，青皮为君药，而橙皮苷则为青皮中主要有效成分。为有效控制本品的质量以保证临床用药安全有效，笔者参考相关文献。建立了以反相高效液相色谱法测定胃舒颗粒中橙皮苷含量的方法。
1 仪器与试药
1．1 仪器
Alliance高效液相色谱仪，包括2690分离单元、996二极管阵列检测器、Millennium 32位色谱管理系统(美国Waters公司)；BP211D型电子天平(德国Sartorius公司)；AS5150A超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。
1．2 试药
胃舒颗粒(重庆医科大学附属第二医院药剂科自制，批号：021101、021102、021103)；橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所)；水为重蒸馏水；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。使用前所有液体试剂均经过0.45μm微孔滤膜滤过。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Symmetry Cl8(150mm×3.9mm，5μm)；流动相：乙腈-水(19.5：80.5)，水中含磷酸(体积比为800：0.1)；流速：1.0ml／min；柱温：30℃；检测波长：284nm；进样量：lOμl；理论塔板数按橙皮苷峰计算不低于3000。
2．2 检测波长的确定
称取橙皮苷对照品适量，用少量甲醇溶解后进样，在190nm～400nm波长范围内扫描。结果表明，橙皮苷的最大吸收波长为284.1nm。
2．3 对照品纯度检查
称取橙皮苷对照品适量，用少量甲醇溶解后，按“2．1”项下色谱条件进样。除去溶剂峰后，用面积归一化法求得橙皮苷对照品的含量为100％，即对照品纯度符合含量测定的要求。
2．4 线性关系考察
准确称取橙皮苷对照品11.4mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0ll4mg／ml的对照品溶液。按“2．1”项下色谱条件，分别吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12、14μl进样测定，记录峰面积(Y)。以Y为纵坐标，进样量(X)为横坐标绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程为Y=2.2651×10000+1.983×1000000X)((r=0.9 996)，表明线性范围为0.0 228μg～O.1596μg。
2．5 供试品溶液及阴性对照品溶液的制备
准确称取胃舒颗粒(批号：021101)约0.5g，置于50ml容量瓶中，加入甲醇约45ml，超声处理30min，放置至室温后加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液。精密量取续滤液2ml，置于5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；另按处方比例及工艺制得不含青皮的阴性颗粒，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。
2．6 精密度试验
精密吸取供试品溶液lOμl，按“2．1”项下色谱条件于1d内重复进样5次，分别测定峰面积，结果RSD=0.4％：
2．7 重现性试验
称取同一批胃舒颗粒样品5份，按“2．5”项下方法制备，并按“2．1”项下色谱条件平行测定5次，结果RSD=1.8％。
2．8 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10μl，按“2．1”项下色谱条件，每隔2h进样1次，连续8h，分别测定峰面积，结果RSD=0.8％。
2．9 加样回收率试验
称取胃舒颗粒样品(批号：021101)6份，准确称定，分别加入一定量橙皮苷对照品，按“2．5”项下方法制备，并按“2．1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。
2．10 阴性对照试验
精密吸取阴性对照品溶液lOμl，按“2．1”项下色谱条件进样测定，结果在与橙皮苷相应的保留时间出峰处无干扰峰。
2．1l 样品含量测定
分别准确称取3批胃舒颗粒样品，按供试品溶液的制备方法制备，并在“2．1”项下色谱条什下进样lOμl，记录色谱，计算样品中橙皮苷的含量。
3 讨论
采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量已有文献报道，但由于中药制剂组成处方不同，故流动相与检测波长不完全相同。笔者曾以文献报道的多种流动相 0进行试验，但均不能使样品的橙皮苷峰与其它干扰组分的峰很好分离。经过大量预试和筛选，加入磷酸调节流动相pH值，并将甲醇改为乙腈，最后得到的流动相可使橙皮苷的色谱峰与其它组分的峰完全分离，且峰形对称而尖锐，大大提高了方法的灵敏度和准确度。笔者曾对样品提取的溶剂、提取方法及提取时间作了考察。结果表明，甲醇较碱性甲醇的提取率高，超声法较回流法的提取率高，提取时间以30min为佳。