中药沙苑子品种鉴别及质量评价

ainuo 网络 2015-12-24 12:09:00

  目的:了解中药沙苑子品种情况,为建立沙苑子药材质量评价方法提供依据。方法:运用TLC法和分光光度法对所收集的22份市售沙苑子药材主要有效成分黄酮进行鉴别研究和总黄酮含量测定。结果:市售沙苑子主要有3种来源,豆科黄芪属植物扁茎黄芪、直立黄芪和紫云英,利用TLC法可使3者较好的鉴别开来。样品中总黄酮含量在0.3%~1.0%。结论:市售沙苑子药材主流为扁茎黄芪同时偶有直立黄芪和紫云英混淆使用;TLC方法可以作为沙苑子药材鉴别的手段;扁茎黄芪总黄酮含量在0.33%~0.82%。
沙苑子;品种鉴别;质量评价;TLC鉴别;总黄酮含量测定
中药沙苑子,又名沙苑蒺藜,在我国用药历史悠久,具有补肾固精,养肝明目的功效。现代研究认为黄酮是沙苑子的主要有效成分。药理研究表明沙苑子总黄酮有明显的降低血清胆固醇、甘油三脂,减轻肝脂肪变形作用,还可降低脂蛋白一胆固醇含量;另外,总黄酮对麻醉大鼠有显著的降压作用,并随剂量加大而加强,同时伴有心率减慢,舒张压下降等作用。
《中国药典》明确规定沙苑子药材应为豆科植物扁茎黄芪Astragalus complanatus R.Br.S的干燥成熟种子,但据报道各地常有不少混淆和代用品,如:凹叶野百合Crotalaria retusa L.、崖州野百合C.yaihsienenstsT.Chert、猪屎豆C.mucronata Desv.、田皂角Aeschynomene indica L.、紫云英A.
sinicus L.、华黄芪A .chinese L.和直立黄芪A.adsuragen Spall等,对沙苑子用药产生不良影响,为了进一步弄清当前沙苑子的用药情况、建立沙苑子定性鉴别方法及阐明沙苑子的内在质量,我们对从全国22个地区收集到的沙苑子样品,针对主要有效成分黄酮建立了TLC鉴别方法,并对总黄酮含量进行了测定,认为TLC法可以作为沙苑子品种鉴别的手段;各地区沙苑子总黄酮含量差异较大,含量在0.3%~0.8%,为进一步阐明沙苑子的质量提供了依据。
1 仪器与材料
U-2000紫外可见分光光度计(日本日立公司)。芦丁对照品(购自中国药品生物制品检定所)。聚酰胺(60~80目,柱层析用,上海化学试剂站分装厂);聚酰胺-6薄膜(薄层层析,浙江台州市路桥四青生化材料厂);所用试剂均为分析纯。
complanatuside A(鼠李柠檬素3,4’-O-β-D-双葡萄糖苷)对照品:自制,纯度大于98%。   
2 样品来源及鉴定
3 TLC定性鉴别
样品液的配制 取沙苑子药材粉末(40目)1g,精密称定,置索氏提取器中,加入石油醚(60~90℃)70mL,回流提取5h,取出,挥干溶剂,连同滤纸,于50mL锥形瓶中,加75%乙醇30mL浸泡1h,超声提取30 rain,取出,放冷、滤过,取滤液5mL,水浴蒸干,残渣加5mL甲醇使溶解,作为样品溶液。
对照品溶液的配制 取complantuside A对照品加50%乙醇制成0.02g/L的溶液,作为对照品溶液。
TLC鉴别 分别吸取样品溶液和对照品溶液2μL,点于聚酰胺薄膜上,以甲醇-水(4:1)为展开剂,展开,取出,凉干,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,加热显色,置紫外光灯(365nm)观察。
4 总黄酮含量测定 J
4.1 标准曲线的制备 精密称取芦丁对照品10mg,于5OmL量瓶中,加适量甲醇使溶解,并定容至刻度,摇匀。精密量取此溶液0.0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5mL于10mL容量瓶中,各精密加入1mL 2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲溶液和1mL 0.1 mol/L三氯化铝溶液,摇匀,加甲醇至刻度,放置50min后,于407nm下进行吸光度测定,以芦丁量为横坐标,吸收度值为纵坐标,经线性回归得回归方程:A=0.0156+22.543X,r=0.9997,线性范围0~0.7 mg。
4.2 样品测定 取沙苑子粉末2g,以石油醚(30-60℃)脱脂,残渣挥尽溶剂,以80%乙醇30mL提取3次,每次1 h,合并醇提液,减压浓缩至适量,加于事先已准备好的聚酰胺柱(60~80目,内径12mm,长100mm)上,先以蒸馏水洗至无色,弃水液,继用50mL 95%乙醇洗脱,蒸干洗脱液,残渣用少量甲醇溶解,置50mL容量瓶中。精密吸取1mL于10mL容量瓶中,按标准曲线制备项下方法加入显色剂、测定。
4.3 回收率测定 精密称取已知含量的陕西渭南沙苑子样品1,共6份,依样品溶液制备方法制备、测定。
5 讨论
5.1 此次收集的22个沙苑子药材样品,涉及全国14个省市和自治区,具有相当的代表性和覆盖率,从实验结果看,当前市售沙苑子主流商品为扁茎黄芪的种子,属药典规定品种,同时少数地区仍有混杂使用直立黄芪和紫云英的情况,在22个样品中未发现曾报道的凹叶野百合、崖州野百合、田皂角、直立黄芪和华黄芪。在药材形态上扁茎黄芪和直立黄芪十分相似,较难区分,在TLC图谱中,紫云英无与complantuside A相对应的斑点,直立黄芪隐约可见,而扁茎黄芪则显明显的对应斑点。扁茎黄芪与直立黄芪有部分相同斑点,但紫云英则与二者少有共同之处,因此,可用TLC作为3者鉴别的方法。
5.2 扁茎黄芪和直立黄芪均含有黄酮成分,从总黄酮含量测定结果看,扁茎黄芪总黄酮含量在0.33%~0.828% ,直立黄芪在0.77% ~1.04%,总体上直立黄芪总黄酮含量高于扁茎黄芪,直立黄芪是否可作沙苑子人药,尚需全面的化学和药理研究。

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