枳壳为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法,以柚皮苷为对照测定其含量。文献报道的枳壳及其制剂的含量测定方法主要为高效液相色谱法和薄层扫描法等。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》枳壳含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(21.5:80.5)(磷酸调节pH值至3)为流动相,检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于2000。
供试品溶液的制备:取本品粗粉约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇50ml,密塞,称定重量,加热回流1.5小时,放冷,再称定重量,用甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加水3~5ml使溶解,放冷,通过聚酰胺柱(50~80目,2g,内径1.8cm,湿法装柱),以水25ml洗脱,弃去水液,再用甲醇50ml洗脱,收集洗脱液,转移至50ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
文献报道HPLC法,总结如下:
实验仪器:Agillent 1100 高效液相色谱仪;岛津LC-10ATVP;Waters 2690 高效液相色谱仪(包括四元梯度泵、自动进样器和柱恒温系统);美国贝克曼高效液相色谱仪等。
色谱条件:①色谱柱:Hypersil ODS2 C18 200mm×4.6mm,5μm;柱温:高温;流动相:乙腈-水(30:70)(冰醋酸调pH=3.5);检测波长:283nm。②乙腈-水(19:81) 用磷酸调pH值至3为流动相;柱温:室温;检测波长为283nm。③色谱柱Kromasil C18 (5μm,250mm×4.6mm );流动相:乙腈-2%冰醋酸水溶液(20:80);检测波长为283nm;④C18ODS 反相柱, 流动相:甲醇-水(45:55);检测波长283nm;室温。
供试品溶液的制备方法:石油醚加热(60~90℃)回流→弃去石油醚,药渣加甲醇水浴加热回流→滤过;甲醇超声或回流提取;药典方法等。
二、薄层扫描法
以薄层扫描法测定柚皮苷的含量报道较多,参看“骨碎补含量测定方法”一文。
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