胡椒含量测定方法（胡椒碱）

　　胡椒为胡椒科植物胡椒Piper nigrum L.的干燥近成熟或成熟果实。2005版《中国药典》一部以胡椒碱为指标，采用高效液相色谱法测定其含量。文献报道的方法主要有高效液相色谱法、
一、高效液相色谱法
2005《中国药典》胡椒含量测定项下（以对二甲氨基苯甲醛为内标）：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（77：23）为流动相，检测波长为343nm；理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500。
供试品溶液的制备：取本品中粉约0.25g，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加无水乙醇约80ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）至少30分钟，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液加内标溶液即得。
文献中HPLC法常用的流动相系统为甲醇-水，检测波长为343nm、345nm，现将常用的实验条件总结如下：
①Waters 600型高效液相色谱仪，附带光电二极管检测器；保护柱: Symmetry C18 柱( 20 mm×39mm, 5μL)，分析柱: Nova-pak C18柱(150mm×3.9mm i.d., 4μm)；
②LC- 6A（5A、10A等）高效液相色谱仪(日本岛津), SPD-6AV 可见-紫外检测器，色谱柱为Shim - pack CLC -ODS ( 6.0×150mm)；
③美国Beckman 液相色谱仪，HP ODS Hypersil（5μm，100×4.6mm）；
④Alliance高效液相色谱仪；色谱柱为LUNA C18（5μm，150mm×4.6mm）；
⑤FRANK-2000型高效液相色谱仪；色谱柱为Hypersil C18(200mm×4.6mm，5μm)；
⑥美国Waters 高效液相色谱仪,Waters600 型泵,Waters996 二极管阵列检测器；　Extend C18 色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)
⑦SP28800 型高效液相色谱仪，SP2200 型可见紫外检测器；国产C18柱(大连化物所, 5μm，4.6 mm×250 mm ) ，ODS预柱；
⑧高效液相色谱仪(美国Perkin Elmer 公司) 包括：LC-295紫外可见检测器，200LC，ANAS-TAR色谱工作站；Hypersil C18 柱(4.6mm×200mm,5μm)；
注意：胡椒碱对光不稳定, 故应选择棕色量瓶, 并尽量避光操作。
另外，范秀玉等改进了胡椒中胡椒碱的含量测定方法。采用Spectra System P1000高效液相色谱仪，Spectra 100紫外检测器。色谱柱为Discovery-C18（5μm，4.6mm×250mm）；流动相为乙腈-醋酸铵缓冲液（取醋酸铵7.7g，加水800ml，使溶解，加冰醋酸调pH约为4.5，加水至1000ml，摇匀，即得。）（40：60）；检测波长343nm；柱温40℃。样品的处理方法同药典。

二、紫外分光光度法
张沛玲采用紫外分光光度法测定胡椒中胡椒碱的含量。测定波长为342nm，以无水乙醇为提取溶剂。
胡椒碱的相关报道见本网站荜茇的含量测定方法介绍。