薄层扫描法测定复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷的含量

　　复方仙灵脾注射液是由淫羊藿、黄芪等中药材组成，临床上用于治疗中风后遗症。黄芪甲苷为黄芪的主要有效成分。曾有报道用紫外分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法测定淫羊藿制剂中黄芪甲苷的含量，但复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷含量的测定方法笔者尚未见报道。本实验采用薄层扫描法对复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷进行了含量测定，该方法较好地排除了制剂中其他成分的干扰，具有简便、快速、准确等特点，为控制该制剂的内在质量提供了可靠的依据。
1 仪器与试剂
CS-9301型双波长薄层扫描仪(岛津)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；D101大孔吸附树脂(天津制胶厂)；复方仙灵脾注射液(河南中医学院一附院制剂室)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所)；所用试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2．1 对照品溶液的制备
精密称取干燥恒重的黄芪甲苷对照品1.98mg，置2mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，浓度为0.99mg/mL。
2．2 供试品溶液的制备
用移液管精密吸取复方仙灵脾注射液5mL，置分液漏斗中，先用0.1mol/L NaOH饱和过的正丁醇萃取3次(10，15，20mL)，将正丁醇层用正丁醇饱和过的0.1mol/L NaOH溶液洗涤3次(15，20，20mL)，弃去碱液，正丁醇层置水浴上蒸干，残渣以水7mL溶解，置于已处理好的大孔吸附树脂柱上，依次用蒸馏水、40％乙醇、50％乙醇适量进行洗脱。收集50％乙醇洗脱液，蒸干，用少量甲醇溶解，移至5mL量瓶中，用甲醇定容至刻度。
2．3 阴性对照液的制备
按处方比例称取除黄芪以外其他药材，按照复方仙灵脾注射液的工艺进行制备，得阴性对照样品，吸取阴性对照样品5mL，按“2．2”项下方法，得阴性对照液。
2．4 薄层色谱条件
吸附剂：硅胶G-0．5％CMC-Na(3：1)搅拌均匀后，涂布于(10cm×20cm)玻璃板上，厚度为0.5mm，晾干后于105℃活化1h，置干燥器中备用。展开剂：氯仿．甲醇-水(13：7：2)下层液。展开方式为上行，展距为10cm(展开前先饱和30min)。展开后取出薄层板，晾干，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂进行显色，于105℃烘至斑点清晰。紫外365nm定位。
2．5 薄层扫描条件
采用反射法单波长锯齿扫描法，狭缝为1.2mm×1.2mm，线性参数SX=3，扫描宽度为14mm，灵敏度为中等，扫描波长为λs=500nm，λR=700nm。
2．6 线性范围
分别吸取上述对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.00μL，点于同一硅胶G薄层板上，按“2．5”项下的方法进行扫描测定。以斑点峰面积积分值为纵坐标，以黄芪甲苷对照品点样量为横坐标作图，得一不通过原点的直线，其回归方程式为：Y=151.32X+81.38，相关系数r=0.9998。结果表明，黄芪甲苷对照品点样量在1.98～9.90μg 之间，与其峰面积值呈线性关系。
2．7 阴性对照实验
在供试品的色谱中，与黄芪甲苷对照品色谱的相应位置上，显相同的桔黄色荧光斑点，在阴性对照液的相应位置上，无此斑点。
2．8 稳定性实验
在同一薄层板上，点对照品溶液4μL，薄层色谱后，分别于30，60，90，120 min时进行扫描测定，斑点峰面积积分值分别为1265.35，1240.58，1237.79，1232.23。结果表明，在2h内斑点稳定，RSD为1．18％。
2．9 精密度实验
吸取供试品溶液4μL，点相同浓度的5个点于同一薄层板上，斑点峰面积积分值的平均值为1 327.61，RSD为1.60％。
2．10 重复性实验
吸取供试品溶液10μL，对照品溶液4μL，分别点于同一薄层板上，进行扫描测定，再同法测定4次，复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷的含量(mg/mL)分别为0.052，0.052，0.050，0.051，0.049，平均值为0.051mg/mL，RSD为2.57％。
2．11 回收率实验
　精密量取复方仙灵脾注射液5mL，加入0.5mg的对照品，进行扫描测定，计算回收率，平均回收率为99.44％，RSD为1.48％，n=5
2．12 供试品的含量测定
精密吸取供试品溶液10μL，对照品溶液2，4μL，交叉点样于同一薄层板上，进行扫描测定。
3 讨论
3．1 由实验结果可知，在处理样品时，用水、40％乙醇、50％乙醇从大孔吸附树脂色谱柱中洗脱，并取50％乙醇的洗脱液，可以排除制剂中其他成分的干扰。
3．2 通过将薄层板横放点样，并且在展开前预饱和30min，不仅能避免边缘效应对薄层色谱图谱的不良影响，还会使斑点更集中。
3．3 实验表明，采用薄层扫描法测定复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷的含量，操作较为简单，重现性好，灵敏可靠，可以作为控制该制剂质量的依据之一。