无菌检查法

　　无菌检查法系指检查药品与敷料是否无菌的一种方法。 无菌检查的全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物的污染。 生物制品应按卫生部《生物制品制造及检定规程》中有关无菌检查的规定办理。

培养基及其制备方法

1.需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐液体培养基) 酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g 葡萄糖 5g 新鲜配制的0.1％刃天青溶液 1.0ml L－胱氨酸 0.5g (或新鲜配制的0.2％亚甲蓝溶液0.5ml) 硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.5～0.7g (或硫乙醇酸0.3ml) 水 1000ml 酵母浸出粉 5g 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，按量加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。 在无菌检查接种前, 培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5。否则,须经水浴煮沸加热, 只限加热一次。

2.霉菌培养基 胨 5g 磷酸氢二钾（K2HPO4) 1g 酵母浸出粉 2g 硫酸镁（MgSO4・7H2O） 0.5g 葡萄糖 20g 蒸馏水 1000ml 除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH约6.8，煮沸,加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，115℃灭菌20分钟。

３.选择性培养基 (1) 对氨基苯甲酸培养基（用于磺胺类药物的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌培养基及霉菌培养基的处方及制法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后摇匀，分装，115℃灭菌30分钟。

(2) 吐温培养基（用于油剂药品的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌培养基及霉菌培养基的处方及制法，各加10ml的吐温80，摇匀后，分装， 115℃灭菌30分钟。

4.营养肉汤培养基 胨 10g 肉浸液 1000ml 氯化钠 5g 取胨与氯化钠，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。

5.营养琼脂培养基 照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。

6.0.5％葡萄糖肉汤培养基 胨 10g 葡萄糖 5g 氯化钠 5g 肉浸液 1000ml 取胨与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2， 分装，115℃灭菌30分钟。　　

7.霉菌琼脂培养基 照霉菌培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2,分装, 115℃灭菌20分钟，趁热斜放使凝固成斜面。 上述培养基分别按15ml与40ml分装于试管中，装量约为试管高度的2/5，在115℃灭菌30分钟。细菌培养基经30～35℃培养48小时，霉菌培养基经20～25℃培养72小时后，应无菌生长。 培养基的质量应通过灵敏度检查。

培养基灵敏度检查法

1.菌种 (1)藤黄微球菌 (2)生孢梭菌 (3)白色念珠菌　　　　　　　　　　　　

2.操作 取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的霉菌琼脂斜面的新鲜培养物分别用0.9％灭菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；将生孢梭菌的不含琼脂需气菌、厌 气菌培养基的新鲜培养物，吸入灭菌离心管，离心，弃去上清液,菌体用0.9％灭菌氯化钠溶液制成均匀菌悬液。分别取上述菌悬液用0.9％灭菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度 标准管相同的浓度, 然后, 作10倍系列稀释并计数。