决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。2005版《中国药典》以大黄酚为对照,采用高效液相色谱法测定其含量。大黄酚的含量测定方法主要有高效液相色谱法等。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》决明子含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)为流动相;检测波长为254nm.理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)约0.5克,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,置水浴上加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25ml,蒸干,加10%盐酸溶液30ml,置水浴中加热水解1小时,立即冷却,用三氯甲烷振摇提取4次,每次30ml,合并三氯甲烷液,回收溶剂至干,残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)溶解,转移至10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
文献报道的决明子及其制剂的含量测定方法不多,但大黄酚的含量测定方法较多,常采用的流动相系统为甲醇-水、甲醇-磷酸溶液等,现具体举一例。
魏尊喜采用HPLC法测定不同产地决明子中大黄酚含量。HPLC系统:SSI Serie IV泵,SSI M 500 UV-VIS检测器(美国SSI),Rheodyne 7725进样阀,ANASTAR(V52)色谱工作站。色谱条件:Inertsil ODS-3柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇:水(85:15);检测波长254nm。流速:1.O0ml/min。
供试品溶液的制备:取粉碎过20目筛的决明子药材粉末大约0.5g,精密称定,置于100ml磨口瓶中,加水20ml、盐酸2ml,摇匀,置沸水浴中回流水解1h,冷却至室温,加氯仿20ml水浴中回流0.5h,放冷至室温,用分液漏斗分取氯仿层,水层再加氯仿20ml水浴中回流0.5h,放冷至室温,置分液漏斗分取氯仿层,水层用氯仿萃取3次,每次20ml,合并氯仿提取液,用水20ml洗涤,挥干。残留物加甲醇使溶解并移至50ml容量瓶中,再加甲醇稀释至刻度,摇匀,经0.45μm滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
二、薄层扫描法
采用此法测定决明子中大黄酚的含量未见报道。大黄酚的薄层扫描法报道较多,在大黄药材里已介绍过,这里简单介绍一下。常用的条件为:硅胶G薄层板;展开剂:苯-二氯甲烷-甲酸(10:10:1);;测定波长430nm,参比波长700nm。
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