不同剂量PMSG对夏季波杂山羊诱导发情效果的影响

摘　要：采用炔诺酮阴道栓结合孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素的诱导发情方案对江淮地区波杂山羊进行夏季诱导发情处理，比较了不同剂量孕马血清促性腺激素诱导波杂山羊的发情效果，测定了处理羊外周血液雌二醇和孕酮浓度的变化规律。结果表明，每千克体重肌肉注射5IU和8 IU孕马血清促性腺激素时波杂山羊的诱导发情率为100%，显著高于10、12、15IU/kg剂量组的72.22%、71.43%和77.78%，(P<0.05)；不同剂量孕马血清促性腺激素诱导发情羊的受胎率差异不显著(P>0.05)，孕马血清促性腺激素剂量为8 IU/kg时发情羊的受胎率最高(68.75%)；处理羊外周血液雌二醇浓度在发情日达到峰值(119.85 pg/mL±1.63pg/mL)；孕酮在植栓第10天浓度比较高(0.69 ng/mL±0.18ng/mL)，显著高于对照组的基础水平，撤栓后在发情配种时浓度降低，且低于对照组的基础水平。

关键词：诱导发情；孕马血清促性腺激素；雌二醇；孕酮；波杂山羊

夏季羊处于季节性乏情期，主要是受光照、温度等因素的影响。在乏情期羊血液中促性腺激素水平较低，母羊的卵巢活动处于相对静止状态，生殖器官处于周期性萎缩时期。在乏情期应用外源激素处理或采取管理措施等诱导发情技术可以激活母羊的下丘脑-垂体-卵巢性腺轴，恢复卵巢机能状态，刺激卵巢上卵泡发育并排卵。对此，许多学者进行了研究，但由于季节、地区、品种、处理程序等不同，报道的羊诱导发情效果差异较大，尚没有能适合不同条件下的优化诱导发情方案，而且针对黄淮地区波杂山羊乏情期诱导发情的研究尚未见报道。

为了优化非繁殖季节波杂山羊诱导发情方案，提高波杂山羊非繁殖季节诱导发情效率，在张一玲的诱导发情试验中以羊的体重计算孕马血清促性腺激素(pregnant mare serumgonadotropin，PMSG)注射剂量的基础上，以5个不同剂量的PMSG结合炔诺酮阴道栓和人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)，在夏季对江淮地区的波杂山羊进行诱导发情处理，比较处理羊发情和配种受胎情况以及外周血液中雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平变化规律。在夏季对波杂山羊进行诱导发情处理，可以提高波杂山羊的非繁殖季节的诱导发情率

和年繁殖率，实现波杂山羊2年3胎或3年5胎。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　试验时间与地点　2007年5月～7月，合肥博大牧业公司波尔山羊场。

1.1.2　试验羊与分组　波杂母山羊(波尔山羊♂×黄淮白山羊♀)，空怀3个～4个月，体重25 kg～35kg；健康，膘情中等，无繁殖系统疾病。试验前公羊试情20 d，剔除发情羊，以乏情羊作为试验羊。

将试验羊(共107只)随机分为6组，其中5组羊空腹称重并进行诱导发情处理。试验组PMSG的注射剂量为：Ⅰ组5 IU/kg，Ⅱ组8IU/kg，Ⅲ组10 IU/kg，Ⅳ组12 IU/kg，Ⅴ组15 IU/kg。1组羊不作处理，作为对照组。

1.1.3　试验羊饲养管理　舍饲，充分供给全价日粮和清洁饮水；每日户外运动时间不少于6 h。

1.1.4　试验药品　羊用炔诺酮阴道栓，60 mg/枚，西北农林科技大学研制；注射用孕马血清促性腺激素，1 000IU/支，宁波第二激素厂生产；注射用绒毛膜促性素，1 000IU/支，宁波第二激素厂生产；雌二醇和孕酮放射免疫分析试剂盒，北京北方生物技术研究所生产。

1.2　方法

1.2.1　诱导发情与配种　采用炔诺酮阴道栓＋PMSG＋hCG的诱导发情方案。处理程序：以处理日作为第0天，第0天埋植羊用炔诺酮阴道缓慢释放装置；第12天撤栓，并肌肉注射PMSG，按照羊每千克体重5、8、10、12、15IU的剂量分别随机注射发情处理组羊；第13天(注射PMSG后第2天)起观察羊只发情情况和公羊试情，连续试情72h，在此期间的发情羊视为诱导发情成功羊；发情羊一律采用本交，于首次发情后8 h第1次配种，首次配种前2 h～4 h静脉注射hCG400 IU/只，间隔8 h～12 h再配种一次。

1.2.2　血样的采集及血清的制备　在试验过程中共采集血样7次。第1次在植栓的第10天，第2次在撤栓的当天，第3次首次确定发情的当天，第4次在第1次配种的当天，第5、6、7次分别为配种后第3、5、7天。每次颈静脉采血8mL，静置20 min后，3 500 r/min离心10 min，取上层血清置－20 ℃冷冻保存待测。

1.2.3　试验羊发情与受胎的测定　撤栓后观察羊群，并用公羊每天早晚试情各1次。采用公羊试情与外部观察、阴道检查结合的方法确定母羊发情。在发情配种后60d用超声波妊娠诊断仪观察确定试验羊的受胎情况。

1.2.4　数据记录和统计分析　记录波杂山羊的发情、配种和受胎情况，用X2检验对数据进行显著性相关检验。利用放射免疫分析法测定外周血中E2、P4的浓度，并进行分析。

2　结果

2.1　不同剂量PMSG对波杂山羊诱导发情及受胎影响

应用炔诺酮阴道栓＋PMSG＋hCG的方法诱导波杂山羊发情，研究了不同剂量PMSG对波杂山羊诱导发情及受胎的影响。试验中试验羊的发情时间主要集中在撤栓后24h～72h，试验处理羊总的发情率为83.75%，Ⅳ组和Ⅴ组中有的试验羊出现持续发情的情况，试验结果见表1。Ⅰ组和Ⅱ组试验羊的诱导发情率均为100%，显著高于Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组试验羊的诱导发情率(72.22%、71.43%、77.78%，P<0.05)，试验组的诱导发情率极显著的高于对照组(7.41%，P<0.01)。试验组Ⅱ的受胎率比其他各试验组的受胎率高，达到了68.75%，各试验组之间受胎率差异不显著(P>0.05)，但试验组与对照组的受胎率差异极显著(P<0.01)。

表1　不同剂量PMSG对波杂山羊诱导发情及受胎结果

Table 1　Results of estrus induction on crossbreed goat withdifferent doses of PMSG

2.2　试验羊外周血液中E2和P4浓度的变化

试验羊外周血液中E2的浓度变化曲线如图1。对照组波杂山羊外周血液中E2的浓度平均维持在58.43 pg/mL±1.70 pg/mL。试验发情羊在撤栓前和配种后E2的浓度与对照组试验羊的浓度水平相当，撤栓后E2的浓度迅速升高，在发情当天E2的浓度曲线达到了峰值，此时E2的浓度为119.85 pg/mL±1.63 pg/mL，然后缓慢降低到59.30 pg/mL±0.15 pg/mL。

试验羊外周血液中P4的浓度变化曲线如图2。试验组波杂山羊外周血液中P4的浓度在植栓第10天达到了0.69 ng/mL±0.18 ng/mL，显著的高于对照组外周血液中P4浓度的基础值。在第12天时有所下降，撤栓后P4的浓度曲线迅速下降，在配种当天外周血液中P4水平降到了谷值，为0.19 ng/mL±0.07 ng/mL，但发情和配种当天P4的浓度水平差异不显著。配种后外周血液中P4的浓度曲线有上升趋势，但上升的趋势不是很明显。对照组波杂山羊P4的浓度水平维持在0.26 ng/mL±0.03 ng/mL，浓度曲线变化不明显。

图1　雌二醇浓度含量变化

Fig.1　Concentration of E2in different times

图2　孕酮浓度含量变化

Fig.2　Concentration of P4in different times

3　讨论

江淮地区的波杂山羊的发情季节和当地山羊的发情季节相似，发情期主要集中在秋季，春季偶有发情。在山羊的生产中应用同期发情技术可集中发情、集中配种、集中产羔，适合规模化高效养羊；非繁殖季节应用诱导发情技术诱导羊发情，可缩短羊的繁殖周期，提高羊的年繁殖率，从而提高经济效益。在生产中直接应用促性腺激素诱导羊发情的效果不是很理想，所以一般结合孕激素处理。这主要是因为连续给予孕激素处理能抑制垂体促性腺激素的释放，雌激素的分泌一直处于被抑制状态，孕激素作用解除后即能反馈性引起促性腺激素释放，雌激素的分泌迅速升高，形成了分泌高峰，使家畜在短期内出现发情。试验采用炔诺酮阴道栓结合PMSG和hCG方法在夏季诱导波杂山羊发情，研究了不同剂量PMSG对波杂羊诱导发情及受胎的影响。山羊卵巢上卵泡在发情周期中呈现动态变化的生长发育过程，MenchacaA等对其进行了详细的研究发现山羊每个排卵周期具有3个或4个卵泡波，最后一个卵泡波出现的时间出现在13.3 d或14.2d，所以试验中采用炔诺酮阴道栓埋植12d。与张一玲的诱导发情方案相比，本试验的特点主要是根据PMSG产品诱导羊发情的注射剂量，采用了PMSG的5个不同注射剂量，寻求PMSG在夏季诱导波杂山羊发情的最优剂量。

试验中PMSG的注射剂量为5 IU/kg和8 IU/kg试验组诱导发情率达到100%，显著高于10、12、15IU/kg的诱导发情率，极显著的高于对照组，并且12 IU/kg和15IU/kg试验组中有的波杂山羊出现持续发情的现象，试验结果表明低剂量的PMSG在夏季诱导波杂山羊发情的效果好。张学炜在对青年奶山羊非繁殖季节诱导发情试验中的研究结果与本试验的研究结果是一致的，试验中PMSG采用了15IU/kg和20 IU/kg两个水平加以比较，结果高水平的效果不佳，低水平是较为理想的剂量。PMSG注射剂量10 IU/kg和12IU/kg试验组的诱导发情率低于15 IU/kg试验组，可能是试验组中有各有2头流产3个月波杂山羊没有完全恢复的原因。8IU/kg试验组的受胎率与其他试验组之间的受胎率差异不显著，但受胎率高达68.75%。PMSG既具有促卵泡发育又具有促排卵的作用，低剂量的PMSG是促进波杂山羊发情并排卵的最佳注射剂量。发情时试验羊外周血液中E2、P4的浓度变化曲线与羊相应发情周期中的水平变化曲线是一致的。在本试验中，撤栓后外周血中E2的水平达到最高值，这与朱以萍等、赵伟等研究结果基本一致，发情后24 h内血浆中的E2含量持续在一个较高的水平，且显著高于乏情期的含量。在孕激素处理时期，P4的水平比较高，达到了0.69 ng/mL±0.18 ng/mL，撤栓后水平下降，这可能跟孕激素作用解除雌激素分泌增多有关。外周血中P4的浓度变化曲线在发情配种时达到了谷值，并且低于对照组P4的平均水平，此后血液中P4的浓度升高，但浓度变化曲线不是很明显，可能与有的发情试验羊持续发情有关。对照组P4的浓度变化曲线以PMSG波动不明显，与黄群山等报道的结果相符。通过试验发情羊外周血中激素的变化，说明PMSG作为卵泡发育的一个引发因素，对生理性乏情母羊诱导发情是可行且必需的。

在非繁殖季节应用外源激素诱导波杂山羊发情，有的试验组的诱导发情率达到了100%，由此得出采用炔诺酮阴道栓结合PMSG和hCG方法在夏季诱导波杂山羊发情是可行的，而且可在生产中推广应用。在非繁殖季节应用诱导发情技术和繁殖季节应用同期发情技术处理羊群，并结合羔羊的早期断奶和产后母羊体能恢复，可以实现波杂山羊的2年3胎或3年5胎，建立高效高频的产羔体系。