低毒力新城疫抗原抗体复合物疫苗研究

摘　要：用低毒力新城疫病毒LaSota株作为复合物疫苗抗原，与新城疫特异性中和抗体混匀配制了不同比例的8种复合物疫苗，用1日龄SPF雏鸡进行免疫效果试验。试验1组～8组分别免疫复合物疫苗1～8，试验9组免疫常规新城疫活疫苗，试验10组为空白对照组。免疫后3周采血测定HI抗体效价，同时用新城疫强毒北京株F48E9攻击。试验1组～10组HI抗体效价分别为23.6、23.1、22.3、24.13、24.85、25.0、25.0、24.5、25.1、22.14。攻毒后1组～10组鸡的死亡率分别为30%、50%、90%、10%、0%、0%、0%、0%、0%、100%。结果表明，低毒力新城疫病毒LaSota株与特异性抗体制备的复合物疫苗，可以减轻疫苗的毒副作用，提高疫苗的安全性，其免疫效果比常规活苗好。

关键词：新城疫病毒；La Sota毒株；抗原抗体复合物疫苗；免疫效果

鸡新城疫(Newcastledisease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的鸡呼吸道、消化道黏膜出血为典型病变的一种急性、高度接触性及致死性传染病。该病自1926年首次发现以来，已在全球许多国家传播，目前已成为危害养鸡业的主要疾病之一。在现有商品化新城疫疫苗的基础上，更安全更高效的新疫苗一直是禽病研究的重要方向。20世纪60年代，研究人员发现特异性抗体可提高破伤风类毒素对小猪的免疫原性；20世纪90年代初，国外研究者研究猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒时，偶然发现病毒特异性抗体与抗原混合在一起免疫动物时能增强抗原的免疫原性，由此诞生了一种新的疫苗研制技术。目前利用该技术成功研制了鸡传染性法氏囊病病毒抗原抗体复合物疫苗，用于1日龄雏鸡和18日龄胚卵内接种，该疫苗还可与其他胚胎接种产品混合使用(如马立克病活毒疫苗)，并不影响同时接种疫苗的效果。抗原抗体复合物疫苗中抗体主要作用是延缓病毒的释放，其优点在于安全性高和免疫效果比常规疫苗更好。本试验以低毒力的NDV-LaSota株病毒作为抗原，通过试验摸索其中抗原和抗体的最佳比例，配制新城疫抗原抗体复合物疫苗，并将其与常规ND活疫苗在安全性和免疫效果等方面进行比较。

1　材料与方法

1.1　制苗用毒种和攻毒用毒种

低毒力新城疫La Sota株，毒价为109.0EID50/0.1 mL；鸡新城疫强毒北京株F48E9，毒价为108.3ELD50/0.1 mL，由北京市农林科学院畜牧兽医研究所免疫与预防研究室保存。

1.2　SPF鸡胚和1日龄SPF雏鸡

由北京市实验动物中心购进SPF种蛋和1日龄SPF雏鸡，SPF种蛋在北京市农林科学院畜牧兽医研究所研究室自行孵化至所需胚龄。

1.3　抗原的制备

低毒力新城疫La Sota株种毒用灭菌生理盐水作10万倍稀释，经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚，收获72 h～120h的死胚尿囊液，低速离心后取上清分装冻存于－30 ℃。经检验，制备的病毒抗原无菌，HA效价为29，毒价为109.0EID50/0.1 mL。

1.4　抗体的制备

用1.3制备的抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫3周龄SPF鸡，胸部肌肉分点注射，免疫3次，每次间隔3周，最后1次免疫3周后用活毒加强免疫1次，2周后心脏无菌采血分离血清，初步得到的血清首先在56℃水浴30 min灭活补体，在4 ℃以5 000 r/min离心10min，吸取淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体。经检验，制备的抗体无菌，HI效价为210，中和抗体为1∶512。

1.5　抗原抗体复合物疫苗的配制及检测

固定每羽份抗原含量为106.0EID50，分别加入不同量的抗体，在室温下混匀中和，配制抗原抗体复合物疫苗，抗原与抗体的体积比分别为3∶1/4、3∶1/2、3∶1、3∶2、3∶4、3∶8、3∶12、3∶16，配制成复合物疫苗1～8，加入冻干保护剂后充分混匀，真空冻干。制备的抗原抗体复合物每头份所含的抗原量与常规新城疫LaSota活苗所含的抗原量一样，冻干疫苗用灭菌生理盐水还原体积后，HA试验测定疫苗血凝价，并按常规方法测定疫苗的EID。

1.6　免疫效力试验

1日龄SPF雏鸡200只分成10组，每组20只，分别饲养于隔离器内。第1组至第8组分别经颈部皮下接种复合物疫苗1～8；第9组免疫新城疫LaSota常规活疫苗；第10组是空白对照组。免疫后观察记录鸡的疫苗反应情况，3周后采血检测新城疫HI抗体水平，测得的HI数据以2x表示，各组的HI效价为HI值的几何平均数。

1.7　攻毒试验

免疫接种3周后，用鸡新城疫强毒北京株F48E9进行攻毒试验，胸部肌肉注射，攻毒剂量每只为104.0ELD50，攻毒后观察2周，记录鸡群的发病症状和死亡情况，并剖检观察病死鸡的病理变化。

2　结果

2.1　抗原抗体复合物的效价检验

用制备的抗原和抗体配制了8种不同比例的冻干复合物疫苗，冻干疫苗用灭菌生理盐水还原体积后测定HA效价和EID50。经试验测定，与含106.0EID50抗原的一羽份活苗相比，随着复合物疫苗中抗体比例的增加，复合物疫苗的HA效价逐步也由26变为0，毒价从106.0EID50/0.1 mL下降至102.7EID50/0.1 mL。

2.2　免疫试验的结果

2.2.1　疫苗免疫后鸡群的临床症状　1组～8组鸡接种复合物疫苗后均无任何反应，采食饮水正常；第9组鸡接种疫苗后，有3只鸡出现新城疫症状，表现有精神萎顿，羽毛松乱，轻微喘气甚至张口呼吸，排青绿色稀粪，3d～4 d后症状消失；第10组鸡一直保持健康，说明隔离器运转正常。

2.2.2　疫苗免疫后鸡群的HI抗体效价　免疫后3周测定HI抗体效价，试验1组～10组HI抗体效价分别为23.6、23.1、22.3、24.13、24.85、25.0、25.0、24.5、25.1、22.14。试验结果提示疫苗免疫组HI抗体水平的变化与疫苗中的抗体含量密切相关，随着抗体的增加，疫苗效力先降低，疫苗免疫产生的抗体水平逐渐下降，直至完全中和时抗体水平降至22.3；抗体进一步增加，疫苗效力又开始回升，抗体水平逐步上升，并在一个范围内维持最高水平，疫苗效力最好，这时疫苗与常规活苗的抗体水平相当；当超过这个范围，疫苗效力又由于抗体过量开始下降。试验10为空白对照组，HI抗体效价一直维持在22左右，说明隔离器运转正常，鸡群没有受到外来新城疫病毒的感染。

2.3　攻毒后各组鸡发病和死亡情况

试验1、2、3、4、10组在攻毒后第3天和第4天，鸡出现新城疫发病症状，在观察期内，第1组发病7只，死亡6只；第2组发病12只，死亡10只；第3组发病19只，死亡18只；第4组发病2只，死亡2只；第10组为空白对照组，攻毒后7d内全部发病死亡。剖检死鸡，病程急发病快的多无典型新城疫病变，病程长的死亡鸡则呈现为典型的新城疫病变(表1)。

表1　试验鸡免疫后3周用新城疫强毒北京株F48E9攻毒试验结果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　讨论

抗原抗体复合物疫苗是一种新型疫苗，当抗原与抗体混匀结合后，抗体能保护活病毒免受机体免疫系统的攻击，同时延缓病毒释放。制备抗原抗体复合物疫苗的关键是抗体和抗原的最佳复合比例，PokricB等认为，抗原抗体复合物中抗原和抗体的比例对复合物疫苗效果最为重要，复合物中抗体过量会抑制复合物对免疫淋巴细胞的刺激作用，抗原稍过量或抗原抗体等价，复合物才能产生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通过固定抗原含量为106.0EID50/羽份，逐步增加抗体的量配制了8种不同比例的抗原抗体复合物疫苗，免疫1日龄SPF雏鸡3周后攻毒，测定了HI抗体效价，并分析了各组免疫鸡的发病和死亡情况。试验结果表明，复合物疫苗中抗体太少，降低了疫苗的免疫效力，随着抗体的增加，配制的疫苗效力逐渐降低，最后几乎达到了不免疫无抗体水平；抗体进一步增加，疫苗效力又开始逐步升高，并在一定范围内维持高效力水平；当抗体再增加时，疫苗由于含有过多的抗体其效力再次出现下降。当抗原抗体比例在3∶4至3∶12之间，即复合物疫苗5、6和7免疫鸡后能产生较高的抗体水平，免疫效力最好，抗体滴度比较均一，攻毒保护率达到100%，疫苗毒价在103.2EID50/0.1mL～103.5EID50/0.1mL之间，HA效价均为0。

复合物疫苗免疫的鸡群中，第1、2和3组分别有1或2只鸡发病最后没有死亡，但表现出神经症状，如歪脖，头部震颤等症状，推测发病鸡虽有抗体但不能完全保护强毒的攻击，耐过后有新城疫神经后遗症。复合物疫苗5、6和7对1日龄SPF雏鸡免疫产生的抗体水平与常规活苗免疫的相当，并且抗体水平比较均匀，对强毒攻击都能提供100%的保护，但常规活苗免疫1日龄SPF雏鸡时伴有疫苗反应，雏鸡较弱可导致鸡只的死亡，而复合物疫苗对雏鸡没有明显的毒副作用，接种1日龄SPF雏鸡不受任何影响。试验结果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相应的特异性抗体按一定比例和一定的感作时间混匀结合后，可以明显降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同时，提高了疫苗的安全性。

目前，鸡传染性法氏囊抗原抗体复合物疫苗已成功应用于市场，在防控商品鸡传染性法氏囊病发挥了重要作用。使用抗原抗体复合物疫苗可增强家禽的免疫反应，加强保护性免疫，但其作用机理仍不十分清楚，一般认为抗原抗体复合物疫苗的作用机制与复合物能直接与滤泡树突状细胞(FDC)结合的特异能力有关。Jeurissen H M等调查了IBD复合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情况，结果表明，接种疫苗后，免疫复合物与FDC结合后可长时间滞留在细胞表面，FDC不能内化复合物，因而疫苗中的活病毒也得到保护，可以免受淋巴细胞的攻击。但部分传染性病毒被FDC转运至淋巴结并定居，在淋巴结内诱导产生更多的生发中心，使得疫苗病毒复制的效率更高。由于复合物疫苗中抗体分子Fc片段与APC的Fc受体有很高的亲合性，因而使得与疫苗中病毒更易更有效地与APC结合。复合物易被APC吞噬和内化，因而病毒不会被杀灭，且还能复制，最后激活B淋巴细胞和T淋巴细胞，刺激B淋巴细胞成为抗体分泌细胞，从而引起强烈的体液免疫反应和细胞免疫应答。本试验的结果也显示，当复合物疫苗中抗原抗体在恰当比例时，接种后机体也能产生高水平的抗体，虽然其独特的作用机制与常规活苗的不一样，但复合物疫苗安全性高，免疫效果总体上较常规活苗更好。

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试验1、2、3、4、10组在攻毒后第3天和第4天，鸡出现新城疫发病症状，在观察期内，第1组发病7只，死亡6只；第2组发病12只，死亡10只；第3组发病19只，死亡18只；第4组发病2只，死亡2只；第10组为空白对照组，攻毒后7d内全部发病死亡。剖检死鸡，病程急发病快的多无典型新城疫病变，病程长的死亡鸡则呈现为典型的新城疫病变(表1)。

表1　试验鸡免疫后3周用新城疫强毒北京株F48E9攻毒试验结果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　讨论

抗原抗体复合物疫苗是一种新型疫苗，当抗原与抗体混匀结合后，抗体能保护活病毒免受机体免疫系统的攻击，同时延缓病毒释放。制备抗原抗体复合物疫苗的关键是抗体和抗原的最佳复合比例，PokricB等认为，抗原抗体复合物中抗原和抗体的比例对复合物疫苗效果最为重要，复合物中抗体过量会抑制复合物对免疫淋巴细胞的刺激作用，抗原稍过量或抗原抗体等价，复合物才能产生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通过固定抗原含量为106.0EID50/羽份，逐步增加抗体的量配制了8种不同比例的抗原抗体复合物疫苗，免疫1日龄SPF雏鸡3周后攻毒，测定了HI抗体效价，并分析了各组免疫鸡的发病和死亡情况。试验结果表明，复合物疫苗中抗体太少，降低了疫苗的免疫效力，随着抗体的增加，配制的疫苗效力逐渐降低，最后几乎达到了不免疫无抗体水平；抗体进一步增加，疫苗效力又开始逐步升高，并在一定范围内维持高效力水平；当抗体再增加时，疫苗由于含有过多的抗体其效力再次出现下降。当抗原抗体比例在3∶4至3∶12之间，即复合物疫苗5、6和7免疫鸡后能产生较高的抗体水平，免疫效力最好，抗体滴度比较均一，攻毒保护率达到100%，疫苗毒价在103.2EID50/0.1mL～103.5EID50/0.1mL之间，HA效价均为0。

复合物疫苗免疫的鸡群中，第1、2和3组分别有1或2只鸡发病最后没有死亡，但表现出神经症状，如歪脖，头部震颤等症状，推测发病鸡虽有抗体但不能完全保护强毒的攻击，耐过后有新城疫神经后遗症。复合物疫苗5、6和7对1日龄SPF雏鸡免疫产生的抗体水平与常规活苗免疫的相当，并且抗体水平比较均匀，对强毒攻击都能提供100%的保护，但常规活苗免疫1日龄SPF雏鸡时伴有疫苗反应，雏鸡较弱可导致鸡只的死亡，而复合物疫苗对雏鸡没有明显的毒副作用，接种1日龄SPF雏鸡不受任何影响。试验结果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相应的特异性抗体按一定比例和一定的感作时间混匀结合后，可以明显降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同时，提高了疫苗的安全性。

目前，鸡传染性法氏囊抗原抗体复合物疫苗已成功应用于市场，在防控商品鸡传染性法氏囊病发挥了重要作用。使用抗原抗体复合物疫苗可增强家禽的免疫反应，加强保护性免疫，但其作用机理仍不十分清楚，一般认为抗原抗体复合物疫苗的作用机制与复合物能直接与滤泡树突状细胞(FDC)结合的特异能力有关。Jeurissen H M等调查了IBD复合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情况，结果表明，接种疫苗后，免疫复合物与FDC结合后可长时间滞留在细胞表面，FDC不能内化复合物，因而疫苗中的活病毒也得到保护，可以免受淋巴细胞的攻击。但部分传染性病毒被FDC转运至淋巴结并定居，在淋巴结内诱导产生更多的生发中心，使得疫苗病毒复制的效率更高。由于复合物疫苗中抗体分子Fc片段与APC的Fc受体有很高的亲合性，因而使得与疫苗中病毒更易更有效地与APC结合。复合物易被APC吞噬和内化，因而病毒不会被杀灭，且还能复制，最后激活B淋巴细胞和T淋巴细胞，刺激B淋巴细胞成为抗体分泌细胞，从而引起强烈的体液免疫反应和细胞免疫应答。本试验的结果也显示，当复合物疫苗中抗原抗体在恰当比例时，接种后机体也能产生高水平的抗体，虽然其独特的作用机制与常规活苗的不一样，但复合物疫苗安全性高，免疫效果总体上较常规活苗更好。

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试验1、2、3、4、10组在攻毒后第3天和第4天，鸡出现新城疫发病症状，在观察期内，第1组发病7只，死亡6只；第2组发病12只，死亡10只；第3组发病19只，死亡18只；第4组发病2只，死亡2只；第10组为空白对照组，攻毒后7d内全部发病死亡。剖检死鸡，病程急发病快的多无典型新城疫病变，病程长的死亡鸡则呈现为典型的新城疫病变(表1)。

表1　试验鸡免疫后3周用新城疫强毒北京株F48E9攻毒试验结果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　讨论

抗原抗体复合物疫苗是一种新型疫苗，当抗原与抗体混匀结合后，抗体能保护活病毒免受机体免疫系统的攻击，同时延缓病毒释放。制备抗原抗体复合物疫苗的关键是抗体和抗原的最佳复合比例，PokricB等认为，抗原抗体复合物中抗原和抗体的比例对复合物疫苗效果最为重要，复合物中抗体过量会抑制复合物对免疫淋巴细胞的刺激作用，抗原稍过量或抗原抗体等价，复合物才能产生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通过固定抗原含量为106.0EID50/羽份，逐步增加抗体的量配制了8种不同比例的抗原抗体复合物疫苗，免疫1日龄SPF雏鸡3周后攻毒，测定了HI抗体效价，并分析了各组免疫鸡的发病和死亡情况。试验结果表明，复合物疫苗中抗体太少，降低了疫苗的免疫效力，随着抗体的增加，配制的疫苗效力逐渐降低，最后几乎达到了不免疫无抗体水平；抗体进一步增加，疫苗效力又开始逐步升高，并在一定范围内维持高效力水平；当抗体再增加时，疫苗由于含有过多的抗体其效力再次出现下降。当抗原抗体比例在3∶4至3∶12之间，即复合物疫苗5、6和7免疫鸡后能产生较高的抗体水平，免疫效力最好，抗体滴度比较均一，攻毒保护率达到100%，疫苗毒价在103.2EID50/0.1mL～103.5EID50/0.1mL之间，HA效价均为0。

复合物疫苗免疫的鸡群中，第1、2和3组分别有1或2只鸡发病最后没有死亡，但表现出神经症状，如歪脖，头部震颤等症状，推测发病鸡虽有抗体但不能完全保护强毒的攻击，耐过后有新城疫神经后遗症。复合物疫苗5、6和7对1日龄SPF雏鸡免疫产生的抗体水平与常规活苗免疫的相当，并且抗体水平比较均匀，对强毒攻击都能提供100%的保护，但常规活苗免疫1日龄SPF雏鸡时伴有疫苗反应，雏鸡较弱可导致鸡只的死亡，而复合物疫苗对雏鸡没有明显的毒副作用，接种1日龄SPF雏鸡不受任何影响。试验结果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相应的特异性抗体按一定比例和一定的感作时间混匀结合后，可以明显降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同时，提高了疫苗的安全性。

目前，鸡传染性法氏囊抗原抗体复合物疫苗已成功应用于市场，在防控商品鸡传染性法氏囊病发挥了重要作用。使用抗原抗体复合物疫苗可增强家禽的免疫反应，加强保护性免疫，但其作用机理仍不十分清楚，一般认为抗原抗体复合物疫苗的作用机制与复合物能直接与滤泡树突状细胞(FDC)结合的特异能力有关。Jeurissen H M等调查了IBD复合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情况，结果表明，接种疫苗后，免疫复合物与FDC结合后可长时间滞留在细胞表面，FDC不能内化复合物，因而疫苗中的活病毒也得到保护，可以免受淋巴细胞的攻击。但部分传染性病毒被FDC转运至淋巴结并定居，在淋巴结内诱导产生更多的生发中心，使得疫苗病毒复制的效率更高。由于复合物疫苗中抗体分子Fc片段与APC的Fc受体有很高的亲合性，因而使得与疫苗中病毒更易更有效地与APC结合。复合物易被APC吞噬和内化，因而病毒不会被杀灭，且还能复制，最后激活B淋巴细胞和T淋巴细胞，刺激B淋巴细胞成为抗体分泌细胞，从而引起强烈的体液免疫反应和细胞免疫应答。本试验的结果也显示，当复合物疫苗中抗原抗体在恰当比例时，接种后机体也能产生高水平的抗体，虽然其独特的作用机制与常规活苗的不一样，但复合物疫苗安全性高，免疫效果总体上较常规活苗更好。

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试验1、2、3、4、10组在攻毒后第3天和第4天，鸡出现新城疫发病症状，在观察期内，第1组发病7只，死亡6只；第2组发病12只，死亡10只；第3组发病19只，死亡18只；第4组发病2只，死亡2只；第10组为空白对照组，攻毒后7d内全部发病死亡。剖检死鸡，病程急发病快的多无典型新城疫病变，病程长的死亡鸡则呈现为典型的新城疫病变(表1)。

表1　试验鸡免疫后3周用新城疫强毒北京株F48E9攻毒试验结果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　讨论

抗原抗体复合物疫苗是一种新型疫苗，当抗原与抗体混匀结合后，抗体能保护活病毒免受机体免疫系统的攻击，同时延缓病毒释放。制备抗原抗体复合物疫苗的关键是抗体和抗原的最佳复合比例，PokricB等认为，抗原抗体复合物中抗原和抗体的比例对复合物疫苗效果最为重要，复合物中抗体过量会抑制复合物对免疫淋巴细胞的刺激作用，抗原稍过量或抗原抗体等价，复合物才能产生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通过固定抗原含量为106.0EID50/羽份，逐步增加抗体的量配制了8种不同比例的抗原抗体复合物疫苗，免疫1日龄SPF雏鸡3周后攻毒，测定了HI抗体效价，并分析了各组免疫鸡的发病和死亡情况。试验结果表明，复合物疫苗中抗体太少，降低了疫苗的免疫效力，随着抗体的增加，配制的疫苗效力逐渐降低，最后几乎达到了不免疫无抗体水平；抗体进一步增加，疫苗效力又开始逐步升高，并在一定范围内维持高效力水平；当抗体再增加时，疫苗由于含有过多的抗体其效力再次出现下降。当抗原抗体比例在3∶4至3∶12之间，即复合物疫苗5、6和7免疫鸡后能产生较高的抗体水平，免疫效力最好，抗体滴度比较均一，攻毒保护率达到100%，疫苗毒价在103.2EID50/0.1mL～103.5EID50/0.1mL之间，HA效价均为0。

复合物疫苗免疫的鸡群中，第1、2和3组分别有1或2只鸡发病最后没有死亡，但表现出神经症状，如歪脖，头部震颤等症状，推测发病鸡虽有抗体但不能完全保护强毒的攻击，耐过后有新城疫神经后遗症。复合物疫苗5、6和7对1日龄SPF雏鸡免疫产生的抗体水平与常规活苗免疫的相当，并且抗体水平比较均匀，对强毒攻击都能提供100%的保护，但常规活苗免疫1日龄SPF雏鸡时伴有疫苗反应，雏鸡较弱可导致鸡只的死亡，而复合物疫苗对雏鸡没有明显的毒副作用，接种1日龄SPF雏鸡不受任何影响。试验结果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相应的特异性抗体按一定比例和一定的感作时间混匀结合后，可以明显降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同时，提高了疫苗的安全性。

目前，鸡传染性法氏囊抗原抗体复合物疫苗已成功应用于市场，在防控商品鸡传染性法氏囊病发挥了重要作用。使用抗原抗体复合物疫苗可增强家禽的免疫反应，加强保护性免疫，但其作用机理仍不十分清楚，一般认为抗原抗体复合物疫苗的作用机制与复合物能直接与滤泡树突状细胞(FDC)结合的特异能力有关。Jeurissen H M等调查了IBD复合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情况，结果表明，接种疫苗后，免疫复合物与FDC结合后可长时间滞留在细胞表面，FDC不能内化复合物，因而疫苗中的活病毒也得到保护，可以免受淋巴细胞的攻击。但部分传染性病毒被FDC转运至淋巴结并定居，在淋巴结内诱导产生更多的生发中心，使得疫苗病毒复制的效率更高。由于复合物疫苗中抗体分子Fc片段与APC的Fc受体有很高的亲合性，因而使得与疫苗中病毒更易更有效地与APC结合。复合物易被APC吞噬和内化，因而病毒不会被杀灭，且还能复制，最后激活B淋巴细胞和T淋巴细胞，刺激B淋巴细胞成为抗体分泌细胞，从而引起强烈的体液免疫反应和细胞免疫应答。本试验的结果也显示，当复合物疫苗中抗原抗体在恰当比例时，接种后机体也能产生高水平的抗体，虽然其独特的作用机制与常规活苗的不一样，但复合物疫苗安全性高，免疫效果总体上较常规活苗更好。

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试验1、2、3、4、10组在攻毒后第3天和第4天，鸡出现新城疫发病症状，在观察期内，第1组发病7只，死亡6只；第2组发病12只，死亡10只；第3组发病19只，死亡18只；第4组发病2只，死亡2只；第10组为空白对照组，攻毒后7d内全部发病死亡。剖检死鸡，病程急发病快的多无典型新城疫病变，病程长的死亡鸡则呈现为典型的新城疫病变(表1)。

表1　试验鸡免疫后3周用新城疫强毒北京株F48E9攻毒试验结果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　讨论

抗原抗体复合物疫苗是一种新型疫苗，当抗原与抗体混匀结合后，抗体能保护活病毒免受机体免疫系统的攻击，同时延缓病毒释放。制备抗原抗体复合物疫苗的关键是抗体和抗原的最佳复合比例，PokricB等认为，抗原抗体复合物中抗原和抗体的比例对复合物疫苗效果最为重要，复合物中抗体过量会抑制复合物对免疫淋巴细胞的刺激作用，抗原稍过量或抗原抗体等价，复合物才能产生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通过固定抗原含量为106.0EID50/羽份，逐步增加抗体的量配制了8种不同比例的抗原抗体复合物疫苗，免疫1日龄SPF雏鸡3周后攻毒，测定了HI抗体效价，并分析了各组免疫鸡的发病和死亡情况。试验结果表明，复合物疫苗中抗体太少，降低了疫苗的免疫效力，随着抗体的增加，配制的疫苗效力逐渐降低，最后几乎达到了不免疫无抗体水平；抗体进一步增加，疫苗效力又开始逐步升高，并在一定范围内维持高效力水平；当抗体再增加时，疫苗由于含有过多的抗体其效力再次出现下降。当抗原抗体比例在3∶4至3∶12之间，即复合物疫苗5、6和7免疫鸡后能产生较高的抗体水平，免疫效力最好，抗体滴度比较均一，攻毒保护率达到100%，疫苗毒价在103.2EID50/0.1mL～103.5EID50/0.1mL之间，HA效价均为0。

复合物疫苗免疫的鸡群中，第1、2和3组分别有1或2只鸡发病最后没有死亡，但表现出神经症状，如歪脖，头部震颤等症状，推测发病鸡虽有抗体但不能完全保护强毒的攻击，耐过后有新城疫神经后遗症。复合物疫苗5、6和7对1日龄SPF雏鸡免疫产生的抗体水平与常规活苗免疫的相当，并且抗体水平比较均匀，对强毒攻击都能提供100%的保护，但常规活苗免疫1日龄SPF雏鸡时伴有疫苗反应，雏鸡较弱可导致鸡只的死亡，而复合物疫苗对雏鸡没有明显的毒副作用，接种1日龄SPF雏鸡不受任何影响。试验结果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相应的特异性抗体按一定比例和一定的感作时间混匀结合后，可以明显降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同时，提高了疫苗的安全性。

目前，鸡传染性法氏囊抗原抗体复合物疫苗已成功应用于市场，在防控商品鸡传染性法氏囊病发挥了重要作用。使用抗原抗体复合物疫苗可增强家禽的免疫反应，加强保护性免疫，但其作用机理仍不十分清楚，一般认为抗原抗体复合物疫苗的作用机制与复合物能直接与滤泡树突状细胞(FDC)结合的特异能力有关。Jeurissen H M等调查了IBD复合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情况，结果表明，接种疫苗后，免疫复合物与FDC结合后可长时间滞留在细胞表面，FDC不能内化复合物，因而疫苗中的活病毒也得到保护，可以免受淋巴细胞的攻击。但部分传染性病毒被FDC转运至淋巴结并定居，在淋巴结内诱导产生更多的生发中心，使得疫苗病毒复制的效率更高。由于复合物疫苗中抗体分子Fc片段与APC的Fc受体有很高的亲合性，因而使得与疫苗中病毒更易更有效地与APC结合。复合物易被APC吞噬和内化，因而病毒不会被杀灭，且还能复制，最后激活B淋巴细胞和T淋巴细胞，刺激B淋巴细胞成为抗体分泌细胞，从而引起强烈的体液免疫反应和细胞免疫应答。本试验的结果也显示，当复合物疫苗中抗原抗体在恰当比例时，接种后机体也能产生高水平的抗体，虽然其独特的作用机制与常规活苗的不一样，但复合物疫苗安全性高，免疫效果总体上较常规活苗更好。