牦牛巴氏杆菌和葡萄球菌的分离鉴定

2007年7月初，农十二师104团某牛场牦牛因阴雨天气转场。造成牛群突然发病、死亡，主要是犊牛。发病率为3%；致死率为20%。其临床症状：病初体温高达41℃~42℃，精神沉郁，呼吸加快，有痛苦性干咳，下痢，气味恶臭。病理变化：肝肿胀、质脆，个别牛肝表面有坏死灶；肾稍肿；淋巴结明显水肿、出血；肺脏表面有肝变区，呈大理石样花纹，有纤维素性胸膜炎变化，有化脓灶；心包积水；初诊为“牛出血性败血病”，一种以高热和败血症为特征的急性传染病。笔者对其进行实验室检验，确诊为牛巴氏杆菌和葡萄球菌混合感染，并采取了相应的预防措施，控制了本病的发生，报告如下?。?

1材料与方法?

1.1材料（1）无菌采取牛心、肝、脾、肺等脏器，置4℃和20℃冰箱，待检。（2）普通琼脂平板、5%兔或羊鲜血琼脂平板、LB肉汤等。（3）健康昆明系小鼠12只(16~18g)?

1.2方法（1）病料进行触片，分别进行革兰染色、瑞特染色、镜检。（2）将病料分别无菌接种到LB肉汤普通琼脂平板、5%兔或羊鲜血琼脂平板，37℃培养1824h，并进行细菌的纯化培养。（3）将纯培养物制成菌悬液给分别每组腹腔注射3只小鼠，0.2mL/只。两只腹腔注射LB肉汤做阴性对照。（4）挑取纯培养物无菌接种于常规生化鉴定培养基中，37℃培养24~48h。并上VITEK32型全自动细菌鉴定分析仪。?

2结果?

2.1病原菌检查：取肝、脾、肺等病料触片，革兰染色镜检，观察到革兰阴性小杆菌和阳性球菌；姬姆萨或美蓝染色镜检，观察到球菌和两极浓染的小杆菌。?

2.2菌落形态与培养特性：阴性小杆菌在LB肉汤培养24h后浑浊，连续培养2~3d，有菌膜产生，液体清彻，管底有黏稠液体；在普通琼脂平板上生长贫瘠；在鲜血琼脂培养基上形成灰白色、圆形、微隆起、半透明、湿润、表面光滑、边缘整齐的露珠样菌落，有溶血和不溶血两种菌落。?

阳性球菌在LB肉汤培养24h后浑浊。在普通琼脂平板上生长良好；在鲜血琼脂培养基上形成灰白色、圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐的菌落，轻微溶血。?

2.3动物实验：阴性小杆菌3/3死亡。阳性球菌2/3死亡，1只精神沉郁后健活。阴性对照均存活。?

2.4生化鉴定：不溶血性小杆菌不在麦康凯上生长，靛基质为阳性，甘露糖阳性；溶血性小杆菌在麦康凯培养基上生长缓慢，靛基质为阴性，甘露糖阴性。根据VITEK32型全自动细菌鉴定分析不溶血性小杆菌为多杀巴氏杆菌，溶血性小杆菌为溶血性巴氏杆菌（溶血性曼氏杆菌，球菌为科氏葡萄球菌。?

3小结与讨论

3.1经过流行病学、临床症状、剖检变化及对病牛脏器细菌的分离与鉴定，确定该牛场流行的疾病是由巴氏杆菌和葡萄球菌混合感染所引起的。?

3.2巴氏杆菌为条件性致病菌，多因冬春两季气温骤变、潮湿、营养缺乏等诱因导致机体抵抗力下降，病原菌侵入机体，经淋巴循环，而发生内源性感染。此次发病与当时气候骤变、降雪降温和饲料较为缺乏有关。在分离细菌时，发现部分病牛可检出附红细胞体，这可能也是诱发本病的原因。所以平时要加强饲养管理，避免牲畜受寒、拥挤，保持牛场清洁卫生，定期杀虫灭鼠，作好平时的预防消毒工作，发病时及时隔离治疗。?

3.3新疆地区的多数牲畜已作价归户，由于经济原因多数地区对非强制性免疫疫苗的免疫管理不够，不能按时免疫，造成母畜自身抗体降低，不能给幼畜提供足够的母原抗体，一旦环境出现变化极易造成疫情流行，加之现在市场上没有高免血清和疫苗提供。因此，出现本病首先根据分离细菌选择敏感的药物进行及时的治疗和预防。笔者用分离到的菌株制备自家灭活油佐剂疫苗。并且以小鼠实验，安全性和保护率均较高。对牛群的保护力还待进一步验证。