本试验通过病原菌体外药物敏感试验、人工致病治疗试验探讨治疗仔猪黄痢的有效、安全的中草药复方。?
1材料:
1.1试验仪器:高压灭菌器,生化培养箱,超净工作台,显微镜,冰箱,离心机,常用玻璃器材等。 ?
1.2试验药物:(1)自拟中草药复方:白头翁50g,黄柏40g,秦皮30g,黄连30g,黄芪30g,当归30g,板栗雄花絮50g。(2)黄连解毒汤:黄连30g、黄芩40g、黄柏20g、栀子40g。各味中草药均购于临沂市中草药批发市场。(3)环丙沙星,由山东齐鲁兽药厂生产。?
1.3药敏纸片 (1)西药药敏纸片。青霉素、四环素、链霉素、红霉素、庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、复方磺胺、先锋霉素Ⅴ、氯霉素、氟哌酸、呋喃妥因、氨苄青霉素、羧苄青霉素、痢特灵,由山东农业大学提供(批号060815)。(2)自拟中药复方药敏纸片和黄连解毒汤药敏纸片。由本课题组参照文献介绍的方法自制。?
1.4试验菌株及菌液:为本课题组分离的地方优势型菌株,血清型为 O54。取37 ℃ 16~18 h普通肉汤培养物,用普通肉汤稀释为每毫升5亿个菌,于4℃冰箱保存备用。?
1.5实验动物:3日龄仔猪(杜长大)共计72头,由我院实习基地提供。
2方法:(1)病原菌体外药敏试验:用消毒棉拭子将试验用菌液均匀涂布在普通琼脂培养基平板上,将抗生素药敏纸片和中药药敏纸片分别贴在培养基表面,置37℃恒温箱中培养24 h,用游标卡尺测量抑菌圈直径。(2)判定试验结果判定标准为:抑菌圈直径小于10mm为耐药;10~15 mm为中度敏感;15 mm以上为高度敏感。(3)人工致病治疗试验:①分组及人工感染。选取6窝3日龄仔猪(母猪未免疫大肠杆菌疫苗),每窝保留12头仔猪,分别记为Ⅰ~Ⅵ组。在每一窝中每2头一组,随机分为A、B、C、D、E、F 6个小组,然后再将它们分别分配到Ⅰ~Ⅵ组,每组12头仔猪。分配到的仔猪体表涂上新母猪的粪尿。6个试验组中,其中Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为阳性对照组,Ⅲ组为西药组,Ⅳ组为自拟中药组,Ⅴ组为中西医结合组,Ⅵ组为黄连解毒汤组。Ⅰ组每头实验仔猪口服生理盐水0.3 mL,其余各组每只口服试验大肠杆菌菌液0.3 mL;②治疗。人工感染10 h后各组相继发病,各组按预先设计剂量及途径给药,Ⅰ、Ⅱ组均不给药;Ⅲ组发病仔猪肌肉注射本试验菌株的高敏药物环丙沙星(5 mg/kg);Ⅳ组将上述自拟方剂的各中药混合共研细末,哺乳母猪拌料喂服(上述方药为1头母猪服用量),1日1剂,连用3剂,同时取上述方剂的中药煎水,灌服发病仔猪(上述方药为10头仔猪的灌服量),每日两次,连用3 d;Ⅴ组同时采取Ⅲ组和Ⅳ组措施;Ⅵ组使用黄连解毒汤,方法同Ⅳ组;③试验期间试验组与对照组采取相同的饲养管理措施。搞好卫生:及时清扫粪尿、更换垫草,保持舍内干燥,解决好保温与通风的问题。加强消毒:加强环境消毒,舍内用2%百毒杀每日进行1次带猪消毒。每次哺乳前将母猪的乳房、乳头、腹部等体表用1%高锰酸钾水浸泡的毛巾擦洗消毒;④疗效判定。治愈:下痢消失,粪便形状、颜色、排粪次数恢复正常,精神、食欲恢复正常。有效:下痢减轻,粪便有好转,精神、食欲尚未完全好转。无效:下痢症状无好转或加重,食欲、精神状况无明显改变,病仔猪甚至死亡。数据的显著性检测,发病率、有效率及治愈率均用卡方检验。?
3结果与分析:
(1)体外药敏试验:体外药敏试验表明,治疗本大肠杆菌病的高度敏感药物有环丙沙
星、卡那霉素和痢特灵,中度敏感药物有羧苄青霉素、氯霉素、庆〖JP2〗大霉素和呋喃妥因,对其他药物均不敏感。自拟中药纸片抑菌圈直径为13.7 mm,属中度敏感药物。黄连解毒汤抑菌圈直径为12.7 mm,属中度敏感药物。 (2)人工致病治疗试验 由表1可知,Ⅳ组(自拟中药组)与Ⅰ组(空白对照组)、Ⅱ(阳性对照组)、Ⅵ组(黄连解毒汤组)相比差异显著(P
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