【性状】本品为棕色疏松团块,加PBS后能迅速溶解,不出现肉眼可见的凝块。
【作用与用途】用于诊断猪支原体肺炎的微量间接血凝试验。
【用法和判定】
(1)用法
a.首先用记号笔在72孔“V”型微量反应板的一边标明被检血清、阳性猪血清、阴性猪血清及抗原对照,各占一排孔。
b.滴加稀释剂 用微量移液器每孔加0.025mL稀释剂。
c.血清稀释 使用微量稀释棒先在稀释液中预湿后,经滤纸吸干,再小心地蘸取被检血清立于第一孔中,可“同时稀释11个血清,以双手合掌迅速搓动11根稀释棒,达60次,然后将11根稀释棒小心平移至第2孔,搓同样转速和次数,再移至第3孔(被检血清可以只稀释到第4孔,即血清稀释到l:40),而阳性猪血清、阴性猪血清必须稀释到第6孔。
d.滴加抗原致敏红细胞 用微量移液器吸取摇匀后的2%抗原致敏红细胞悬液,每孔加O.025mL。
e.抗原对照 为O.025mL稀释液加0.025mL 2%抗原致敏红细胞悬液,只做2孔。
F.振荡加样完毕后,置微型振荡器上振荡15~30s,室温下静置1~2h。观察记录结果。
(2)判定
以呈现“++”血凝反应的血清最高稀释度作为血清效价判定终点。凝集反应强度标准如下:
++++ 红细胞在孔底凝成团块,面积较大。
+++ 红细胞在孔底形成较厚层凝集,卷边或锯齿状。
++ 红细胞在孔底形成薄层均匀凝集,面积较上二者大。出现“++”以上凝集时为红细胞凝集阳性。
+ 红细胞不完全沉于孔底,周围少量凝集。
± 红细胞沉于孔底,但周围不光滑或中心空白。
- 红细胞呈点状况于孔底,周边光滑。
微量反应板静置1~2h后,阳性对照猪血清效价应≥40“++”,阴性对照猪血清效价应<1:5,抗原对照应无血凝现象。
被检猪血清效价>l:10(即达到第2孔)以上时,判为阳性;效价<1:5时,判为阴性;介于二者之间时,判为可疑。
【贮藏】在2~8℃,有效期为6个月;在一15℃为1年6个月。
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