（一）繁殖季节、水温
虎纹蛙的繁殖期与气候、温度有密切关系。在华中、中南地区，一般繁殖期为5～9月。如4月上旬连续多日平均气温在20℃以上，虎纹蛙也会开始产卵。在繁殖季节，当气温低于20℃时，虎纹蛙也不进行配对产卵，人工催产效果亦差。其最佳繁殖温度为25～28℃，当气温持续高于32℃时，虎纹蛙卵子开始退化，变成灰白色，受精能力极低，或不能受精。
（二）交配
虎纹蛙一般在晚上进行交配。每只雄蛙都占领一定的区域，彼此间保持一定的距离，雄娃在其占领区内蹲伏不动，高声鸣叫。雌蛙听到雄蛙的鸣叫声，便朝鸣叫方向跳去。雄蛙发现雌蛙进人自己的领域，就跳到雌蛙的后面，爬上其背部，紧紧抱住雌蛙腋下，配对时鸣叫停止。抱对几小时后，雌蛙排卵，雄蛙排精，精、卵在水中结合成合子。虎纹蛙卵子受精后，胶膜也膨胀，但不像牛蛙、美国青蛙膨胀那样大，而卵粒本身的体积比牛蛙、美国青蛙的卵要大些，卵胶膜膨胀后也比它们的弹性要大。受精卵无胶带相连，成单粒，或成小片浮于水面，或黏着于水草及其他物体上。卵的动物极呈黑褐色，植物极乳白色或淡黄色。受精卵的动物极总是朝向上方，植物极朝向下方，即使人为的翻转过来，静置数分钟后，又能自动恢复原来的位置。
（三）产卵与受精
1.自然产卵、受精
自然产卵受精，即是在亲蛙池或者另外设置的产卵池内，模仿虎纹蛙在自然界产卵的生态环境，任其自然发育成熟、排卵受精。
（1）产卵池 如果利用亲蛙池作为产卵池，则池底淤泥要清除干净，池周水面不可有过多的杂草，池中有少量水草，便于采卵。如果另设产卵池，其基本结构与亲蛙池相似，面积可适当小一些（也可与亲蛙池相似），环境安静，不能有人为因素干扰其产卵。产卵池的水深10厘米左右，放人少量的水生植物，如水浮莲、水草等。也可在池的四周人工构建一些亲蛙藏匿的洞穴，洞穴不要完全浸人水中。
（2）雌、雄配组 在繁殖季节开始前，雌、雄比例接1～1.5：1，每平方米放养亲蛙2～3对。放人的亲蛙不可能在短期内产完，所以在产卵期仍应投喂饲料，可以放一些水生昆虫、小鱼到池内，也可投喂人工配合饲料。
（3）繁殖期间日常管理 在繁殖期间，除了日常管理工作外，应尽量减少人为干扰、但要经常进行观察（特别是早晨），以确定产卵是否完成。如果亲蛙少，已基本完成产卵，应立即将亲蛙移放别处，将受精卵留在产卵池内孵化，或者最好是将受精卵移人专门的孵化池或孵化容器中孵化。因为雌蛙产完卵后需要补充营养，摄食量增大，蛙卵和孵出的蝌蚪会被亲蛙吃掉。一般产卵池都比较大，在用产卵池孵化时，要注意观察水质、水温等环境条件的变化，采取相应的措施。要防止暴风雨击沉蛙卵及造成蝌蚪流失。这种繁殖方法简单，产卵率比较高，但孵化率较低一些。如果亲蛙群体较大、产卵时间不一致，孵化时间也会有先后，除了亲蛙会对卵子和蝌蚪造成损害外，先孵化出来的蝌蚪会残食后孵化出来的蝌蚪。即使是将卵子分开进行孵化，也会给操作上及蝌蚪的饲养带来诸多不便。所以在生产上，最好是采用人工催产、自然产卵、受精的方法。
2.人工催产、自然产卵、受精
在自然情况下，虎纹蛙也像其他蛙类一样，无需人工催产，完全可自然产卵、受精。但在人工养殖过程中，也有个别蛙不能自然产卵。至于它们不能自然产卵的原因很多，有环境条件不适合、发育不良、体质较差等。对于这种蛙，可进行人工催产。另外，在生产中，为了管理方便，需要同时或在较短时期内获得大批量的卵，以获得批量的、规格整齐的蝌蚪，也可以用人工催情的方法，使虎纹蛙亲蛙能够基本上同步产卵。人工催产的药物，一般有蛙（虎纹蛙、黑斑蛙或其他蛙）的脑下垂体（PG），绒毛膜促性腺激素（HCG）、促黄体素释放激素类似物（LRH－A）等。单独注射任意一种药物或者以二三种药物混合注射，都可获得很好的催产效果。注射剂量可以亲蛙的只数计算，每只亲蛙（150克左右）单独注射蛙脑垂体时，用2～6个（雌蛙脑垂体的效价比雄蛙脑垂体效价高），或用绒毛膜促性腺激素100国际单位左右，或用促黄体素释放激素类似物3～5微克。两种药物或三种药物混合注射时，可分别取各种药物的1/2或1／3进行注射。雄蛙一般不需要注射促性腺激素来促进精子的生成，但为了促进雄蛙的同步发情，进行“抱合”，可给雄蛙注射相当于雌蛙1/3或1/2的剂量。注射的方式可以采用一次注射法，也可采用两次注射法。两次注射间隔时间为6～8小时，将每只蛙所需要注射的药物用蒸馏水或生理盐水（0.65％氯化纳溶液）稀释成0，2—0.5毫升的药液量，脑垂体必需研磨成匀浆，制成悬液。分两次注射，第一次注射1／5的剂量。注射的部位可采用腹腔注射、皮下注射或肌肉注射，以皮下注射
至尾杆两侧的淋巴心内效果最好。
（1）腹腔注射 左手握住蛙体，在腹部后方1／4处呈45o角倾斜向体内进针，穿过皮肤和腹肌。小心操作，防止损伤内脏。注射完毕后拔出针头。拔针时用手指捏住针头人口处的皮肤，防止药液外溢。
（2）皮下注射 注射时，从尾杆骨一侧由后向前斜向进针，将药物注人淋巴心中，也可以注人其他地方的淋巴囊中，但以注人淋巴心的效果为佳。皮下注射时注意轻轻提起皮肤（注人尾杆骨两侧的淋巴心时无需提起皮肤），防止进针太深，刺伤骨骼和内脏。注射完后，退出针头之前，用手指轻压住注射的部位，使药液分散，以免退针时药液外溢。
（3）肌肉注射 从蛙大腿肌肉部位注射，方法与腹腔注射相同。
注射完毕后，雌、雄蛙按1～1.5：1比例放人产卵池中，使其自然产卵、受精，可在较短时期内（1～2天）获得批量受精卵。
3.人工催产、人工授精
如果需要严格控制同步产卵受精或是实验需要，可采用人工催产、人工授精的方法。但此种方法必须解剖雄蛙取出精巢。催产注射的方法，如同上述。注射后，将雌、雄蛙分开置于小池或容器中（最好是在“抱对”一段时间后再将其分开）。待卵子从雌蛙输卵管进人子宫，可从泄殖腔挤出卵子时，立即解剖雄蛙，取出精巢，除去粘在精巢上的血液和其他结缔组织，在小研钵、培养皿或其他洁净容器中把精巢研碎或剪碎，每对精巢加人干净池水或10%的任氏液5—10毫升，摇匀，静置10—15分钟“激活”精子，即制成了精悬液。然后将卵子挤人盛有精悬液的容器中。挤卵的方法是抓住雌蛙，使其背对右手手心，右手拇指和食指刚好在前肢的后面因住蛙体（如雌蛙个体较大，最好有另一人抓住后肢，使其伸展），用左手从蛙体腹部由前向后挤压，逐渐增加压力，这样就可迫使子宫内的卵从泄殖腔孔排出。边挤卵边摇动容器或用羽毛等物搅拌，使精子和卵子充分接触，2—3、分钟后加人20～30毫升池水，去掉精巢组织块后，即可放人孵化池或孵化盘等孵化容器中孵化。
在水温20℃时。虎纹蛙不进行自然配对繁殖，人工催产效果亦差。水温25～28℃是其最佳繁殖温度，受精率和孵化率均在90％以上，最高可达98%。当气温持续高于32 ℃时，虎纹蛙卵子开始退化，变成灰白色，受精能力极低，或不能受精。
虎纹蛙精子和卵子排人水中后，都可在较长时间内保持受精能力。在26～28℃时，精子遇水后90分钟，仍可使51％的正常成熟卵受精，其孵化率还可达40％；而成熟卵子仍有27％可以受精发育，但其孵化率很低，这可能是卵子开始退化所致。虽然精子和卵子排出体外后仍能保留较长时间的受精力，但卵子以刚从体腔中排出时，其受精能力和发育能力最佳，精液则以经水激活15分钟的精子活力最强。虎纹蛙在25～27℃下。
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