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A、选择题
1、牛结核分枝杆菌在作细菌检查时，以 染色？( C )
A．美兰染色 B．革兰氏染色
C．妻-尼氏抗酸染色 D．瑞氏染色
2、禽流感抗原微量血凝试验，反应板孔内终体积为 微升，试验中所用PBS的PH值为（7.2），浓度为（0.01mol/L）。( C )
A. 25 B. 50
C. 75 D. 100
3、口蹄疫病毒感染相关（VIA）抗原琼脂凝胶免疫扩散试验,最长需要 小时进行结果终判。(D )
A.48 B.72
C.96 D.120
4、传染性法氏囊病微量中和试验，1： 判为可疑，隔周采血测定抗体仍可疑者判为（阴性）( B )
A.32 B.16
C.8 D.4
5、高致病性禽流感、鸡新城疫血凝和血凝抑制试验采用 %的红细胞。( D )
A. 0.25 B. 0.5
C. 0.75 D. 1
6、进行RT-PCR试验时，若提取的RNA需要长期保存，应在 ℃以下保存。( D )
A. -20 B. -40
C. -60 D. -70
7、判断牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应阳性依据：接种部位局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于 mm的为阳性。( D )
A. 1.0 B. 2.0
C. 3.0 D. 4.0
8、在进行禽流感血凝抑制(HI)试验(微量法)时，如果抗原液的血凝试验终点滴度为1：256，则配制A单位抗原时，稀释倍数为 。( A )
A．1：64 B．1：128
C．1：256 D．1：518
9、按以下禽流感琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验出现的结果，应判定被检血清为 血清。其中⑦为抗原，④为标准阳性血清，③为被检血清。( C )
A.非特异性反应； B.阳性；
C.弱阳性； D.弱阴性。
10、传染性囊病样品在接种鸡胚时经 部位接种，接种易感雏鸡时经 部位接种。（ D ）
A.尿囊腔；点眼 B.绒毛尿囊膜；肌肉注射
C.尿囊腔；皮下注射 D.绒毛尿囊膜；点眼、口服
11、以下 可以判定未免疫动物感染布鲁氏菌病？ ( D )
A.虎红平板凝集试验阳性；
B.全乳环状试验阳性；
C.虎红平板凝集试验阳性，但试管凝集试验阴性；
D.补体结合试验阳性
12、布鲁氏菌病的常规实验室检测方法是 。（ C ）
A.琼脂扩散实验
B. 间接血凝实验
C.平板凝集试验
D.变态反应
B、判断题
1、高致病性禽流感致病性测定可采用静脉接种致死指数测定法和致死比例测定法，应在高度生物安全性的实验室中进行。（√）
2、采用异硫氰酸胍提取病毒RNA时，第一次离心完毕后，上层水相中含有RNA。（√）
3、聚合酶链反应产物电泳时，加样的位置应该在靠近（负）极的方向。（√）
4、结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验，皮内注射后（48-72）小时观察反应结果，对于阴性牛和疑似反应牛，于注射后（96）小时和（120）小时再分别观察一次。（√）
5、PCR区应该分配液区、核酸提取区、扩增区和电泳区，流程顺序为单向。严禁器材和试剂倒流。（√）
6、10ml（10倍）浓缩洗涤液，应该加入（90）ml的蒸馏水或去离子水来稀释。（√）
7、进行ELISA试验时，试剂盒拿出冰箱后，应立即进行试验，以免试剂在室温中时间过长而失去其检测的客观性。（×）
8、不同批次的ELISA试剂盒，只要是同一种试剂盒，且试剂均在有效期内，试剂盒内的试剂是可以通用的。（×）
9、口蹄疫正向间接血凝，以呈现完全凝集“++++”的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。（×）
10、马鼻疽点眼反应中，点眼应在早晨进行。（√）
11、我国将炭疽列为一类动物疫病。（×）
12、新城疫病毒是DNA病毒。（×）
13、酶标仪应该即用即开，而不应该提前打开。（×）
14、在所有的ELISA反应中，孔中颜色深，表示样品为阳性；孔中颜色浅，表示样品为阴性。（×）
15、ELISA反应中，加入底物液后应该避光，时间越长，反应越充分，颜色对比越明显，因此应该放置稍长时间后加终止液。（×）
16、红细胞凝集试验所用0、1%鸡红细胞悬液采自1只健康成年鸡血液（×）
17、红细胞凝集试验用于监测抗原的HA效价，红细胞凝集抑制试验用于检测被检血清HI抗体效价。（√）
18、琼脂扩散试验结果判定，阳性对照与被检血清孔之间出现沉淀线，其末端不与阳性沉淀线相连，也可判定为阳性反应。（×）
19、琼脂扩散试验中，有的受检样品产生2条沉淀线，其中一线与已知抗原（抗体）的沉淀线融合者仍判为阳性反应。（√）
20、做动物布病平板凝集实验时，混合完毕后，2－3分钟后判定结果。（√）
21、对一头牛做牛型提纯结核菌素皮内变态反应试验，皮厚差为4、2mm，判定为疑似结核病牛。（×）
22、在猪瘟的直接免疫荧光抗体试验中，在荧光显微镜视野中，见扁桃体隐窝上皮细胞浆内呈明亮的黄绿色荧光，判为猪瘟病毒感染阳性。（√）
23、猪瘟的临床诊断和病理学诊断可以作为确诊的根据。（×）
C、简答题
1、口蹄疫O型正向血凝试验设共哪有几个对照？
答：（1）阴性对照(血清效价＜24)
（2）阳性对照(血清抗体效价＞29)
（3）稀释液对照(无凝集)
2、亚Ⅰ型口蹄疫液相阻断ELISA试验设共哪有几个对照？
答：（1）病毒抗原对照(平均OD492nm值在1、0～2、0范围内)
（2）阳性对照血清(抗体效价在1：1024±1滴度)
（3）阴性对照血清(抗体效价＜1：8)
3、按照《高致病性禽流感防治技术规范》，简述血凝抑制试验成立条件及的判定标准。
答：（1）只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2,阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
（2）HI价小于或等于2 log2判定HI试验阴性;HI价等于3 log2为可疑，需重复试验;HI价大于或等于4log2为阳性。
4、新城疫病毒分离应采集哪些样品？
答：（1）从活禽采集样品应包括气管和泄殖腔拭子。雏禽可采用收集新鲜粪便代替。
（2）死禽以采集脑、肺脏、脾脏为主。
5、猪水泡病的血清学诊断方法有哪些？
答：（1）反向间接血凝试验；
（2）琼脂凝胶免疫扩散试验；
（3）病毒中和试验。
6、进行猪瘟直接免疫荧光抗体试验应采哪些猪组织？
答：扁桃体、淋巴结、脾脏、肾脏。
7、伪狂犬病毒检测的方法通常有哪些？
答：病毒分离鉴定、聚合酶链式反应、家兔接种试验。
8、伪狂犬病毒抗体检测的方法有哪些？
答：中和试验、酶联免疫吸附试验和胶乳凝集试验。
9、符合哪些特征可判为致病性猪链球菌2型阳性？
答：符合猪链球菌2型特性，且主要毒力基因(mrp,ef,orf2,sly)全部或之一PCR检测阳性。
10、马传贫实验室诊断方法主要有哪些？
答：（1） 马传贫琼脂扩散试验(AGID)
（2） 马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA)
（3） 马传贫病原分离鉴定
11、国标中规定的新城疫诊断方法有哪些？
答：临床诊断、病毒分离与鉴定、血凝试验、血凝抑制试验、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。
12、按国标规定，新城疫RT-PCR检测呈阳性后，还应对RT-PCR产物进行序列测定和分析，才能判定为强毒，而非疫苗毒？
答：对毒株的F基因编码的氨基酸序列进行分析，分离毒株F1蛋白N末端117位为苯丙氨酸，F2蛋白C末端有“多个碱性氨基酸残基”。
13、布鲁氏菌病血清学监测中，筛选检测、复核各采用什么试验方法？
答：筛选检测用琥红平板凝集试验；阳性样品用试管凝集反应或补体结合试验进行复核。
14、血吸虫病用什么试验方法进行监测？
答：用间接血凝方法或Dot-ELISA方法检测，结果为阳性的，用粪检法复检，仍为阳性的确诊为阳性畜。
15、狂犬病病毒和抗体常用什么试验方法进行监测？
答：（1）病毒检测：脑组织以直接免疫荧光或RT-PCR进行检测。（2）抗体检测：ELISA方法、免疫荧光灶抑制试验。
16、J亚群鸡白血病有哪些实验室诊断方法？
答：（1）病原分离鉴定；
（2）组织病理学诊断；
（3）酶联免疫吸附试验。
17、高致病性猪蓝耳病的病原监测采用什么试验方法？其与经典猪蓝耳病鉴别的原理是什么？
答：RT-PCR或荧光定量PCR。针对猪蓝耳病病毒的NSP2基因的特征性缺失进行鉴别检测。
18、猪瘟的监测方法有哪些？
答：免疫抗体监测：方法：正向间接血凝试验。（2）判定：免疫21天抗体效价≥25为免疫合格。
原学检测:用荧光免疫抗体或RT-PCR或ELISA方法，对流产、死胎及以高热为特征的死亡病例进行病原学检测。
19、鸡新城疫的监测方法有哪些？判定标准是怎样的？
答：免疫抗体监测方法、判定标准（1）方法：血凝抑制试验。（2）判定：免疫21天抗体效价≥25为免疫合格。
用RT-PCR鉴定方法进行病原学检测。病毒检测：RT-PCR方法结合核酸序列测定。抗体检测：ELISA方法。
20、猪蓝耳病的实验室诊断方法有哪些？
答：（1）病毒分离与鉴定；
（2）免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）；
（3）间接免疫荧光试验（IFA）；
（4）间接ELISA；
（5）RT-PCR及荧光RT-PCR。
D、问答题
1、按照GB/T 18936-2003高致病性禽流感诊断技术，简述禽流感病毒的鉴定步骤。
答：（1）A型流感病毒的型特异性鉴定:用具有血凝活性鸡胚的绒毛尿囊膜(CAM)制成抗原，与A型禽流感病毒标准阳性血清进行AGID试验，检测样品中是否含有A型流感病毒。
（2）血凝素亚型鉴定:用禽流感病毒15种血凝素(H1-H15)亚型分型血清，采用HA-Hl试验方法，对样品进行病毒亚型鉴定。
2、请说出出下列英文简称的含义：HA、HI、IHA、ELISA、PCR、RT-PCR 、AGIP 、CF、VN、HAU、ICPI、IVPI、TCID50。
答：HA:血凝、HI：血凝抑制、IHA：间接血凝抑制、ELISA：酶联免疫吸附试验、CF:补体结合试验、VN:病毒中和试验、HAU：血凝单位、PCR：聚合酶链反应、RT-PCR：反转录-聚合酶链反应、AGIP：琼脂凝胶免疫扩散试验、ICPI：脑内接种致病指数、IVPI：静脉接种致病指数、TCID50：半数组织培养感染量。
3、牛、羊、猪口蹄疫感染情况、不同亚型口蹄疫免疫抗体水平的监测方法有哪些？如何对结果进行判定？
答：(1)免疫抗体检测方法及判定标准：（1）方法：O型口蹄疫用正向间接血凝试验或液相阻断ELISA，亚洲Ⅰ型口蹄疫用液相阻断ELISA。（2）判定：正向间接血凝试验，免疫21天抗体效价≥25为免疫合格；液相阻断ELISA，免疫21天抗体效价≥26为免疫合格。
(2)牛、羊口蹄疫感染情况使用非结构蛋白抗体ELISA方法检测。检测结果阳性的，采集其食道－咽部分泌物（O－P液）用RT－PCR方法检测，若检测结果为阴性应间隔15天再采样检测一次，RT-PCR检测阳性的判定为阳性畜。
(3)对猪的检测：从屠宰场采集猪颌下淋巴结用RT－PCR方法进行检测，结果为阳性的判定为阳性猪，对阳性猪进行流行病学调查。
4、布鲁氏菌病的试管凝集试验，牛、羊、猪各种家畜血清样品判断为阳性的标准是什么？判为可疑后，如何复检、判定。
答：（1）牛、马、鹿和骆驼1:100血清稀释，猪、山羊、绵羊和狗1:50血清稀释，出现“++”以上凝集现象时，受检血清判定为阳性。
（2）牛、马、鹿、骆驼1:50血清稀释，猪、山羊、绵羊、狗1:25血清稀释，出现“++”以上凝集现象时，受检血清判定为可疑反应。
（3）可疑反应家畜经3周-4周后重检，如果仍为可疑，该牛、羊判为阳性。猪和马经重检仍保持可疑水平，而农场的牲畜没有临床症状和大批阳性患畜出现，该畜被判为阴性。
5、如何进行鸡传染性支气管炎的综合判定？
答：对于未接种IBV疫苗，经任何一种方法检测呈阳性结果时，都可判定为IBV感染鸡群。对于接种过IBV疫苗并在疫苗免疫期内的鸡或已超过免疫期的鸡，当病毒分离鉴定试验为阳性时，可判定为IBV感染鸡；当仅血清学试验呈阳性时，应结合病史和疫苗接种史，进行综合判定。
6、高致病性禽流感的病原学诊断指标有哪些？
答：（1）反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测，结果H5 或H7 亚型禽流感阳性；
（2）通用荧光反转录-聚合酶链反应（荧光RT-PCR）检测阳性；
（3）神经氨酸酶抑制（NI）试验阳性；
（4）静脉内接种致病指数（IVPI）大于1、2或用0、2mL 1:10无菌感染流感病毒的鸡胚尿囊液,经静脉注射种8只4-8周龄的易感鸡,在接种后10天内,能致6-7只或8只鸡死亡,即死亡率≥75%;
（5）对血凝素基因裂解位点的氨基酸序列测定结果与高致病性禽流感分离株基因序列相符。
7、如何判定口蹄疫确诊病例？
答：（1）疑似口蹄疫病例，以下病原学检测方法任何一项阳性，可判定为确诊口蹄疫病例：
①间接夹心酶联免疫吸附试验，检测阳性（ELISA OIE 标准方法 ）；
②RT-PCR试验，检测阳性（采用国家确认的方法）；
③反向间接血凝试验（RIHA），检测阳性；
④病毒分离，鉴定阳性。
（2）疑似口蹄疫病例，在不能获得病原学检测样本的情况下，未免疫家畜血清抗体检测阳性或免疫家畜非结构蛋白抗体ELISA检测阳性，可判定为确诊口蹄疫病例。
①中和试验，抗体阳性；
②液相阻断酶联免疫吸附试验，抗体阳性；
③非结构蛋白ELISA检测感染抗体阳性；
④正向间接血凝试验（IHA），抗体阳性。
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