支原体感染所致关节炎诊断及治疗

　　关节炎是指一个或多个关节的关节内组织发生炎症。本病常以关节液增加为特征，因致病病原不同而具有其他不同的特征性病变。具有诊断意义的特征性病变包括色泽的变化、关节液的混浊度、出血或渗出物等。此外，还可以依据以下特性对关节炎进行分类，如：病原、病程(如：急性型、慢性型)、渗出物成分(如：浆液性、纤维素性、化脓性、巨噬细胞性、淋巴浆细胞性等)。

　　猪传染性关节炎通常因细菌性感染所致。可从患有关节炎的关节中分离到如下病原菌：猪丹毒丝菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪放线杆菌、化脓性隐秘杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌、猪滑液支原体、猪鼻支原体。

　　因传染性关节炎会危及动物福利，降低猪场经济效益，故该病逐渐成为困扰生产者的一大问题。虽然很久前已意识到该病及其危害性，但在现代养猪生产实践中，对其致病机理、流行病学与防控措施等方面尚缺乏充分的认知。

　　从2003年～2010年爱荷华州立大学兽医诊断实验室(ISU-VDL)共接诊431例猪跛行的病例。从总体上来看，69%(431例中有289例)的跛行病例为传染性关节炎。在这8年间，支原体所引致的关节炎病例的平均比例为17%，但近年来其比例呈上升趋势，在2010年(见图1)比例高达37%(111例中有41例)。 猪鼻支原体通常发生于≤10周龄以内的猪只。而猪滑液支原体多发生于10周龄以上的猪只(图2)。但是，因为这些诊断数据的固有偏差及样品采集时缺乏随机性，故很难在临床实践中将以上数据与疾病的实际发生率相关联。

　　因爱荷华州立大学兽医诊断实验室所确诊的支原体感染相关关节炎病例呈上升趋势。本文将重点描述猪滑液支原体与猪鼻支原体感染所致关节炎的疾病特征、样品采集要领及检测诊断方法等。

支原体感染所致关节炎诊断及治疗

　　发病机理

　　猪鼻支原体可在猪只上呼吸道繁殖，也可从有肺炎或无肺炎的猪只的肺内分离到该病原。但是，通常在断奶后才可看到全身性病变。该病向全身各处扩散的发生过程尚不清楚，但病原体对浆膜层的专嗜性可导致体腔浆膜与滑膜(沿关节腔内壁分布的一层膜)发生急性炎症。若机体的免疫系统或药物未能有效的缓解这些部位的感染，这些急性病变将转为慢性，导致猪只生长缓慢、生产性能差。在慢性感染阶段，通常可以看到以纤维素性粘连为主要特征的浆液纤维素性胸膜炎、心包炎与腹膜炎等病变。

　　猪只在感染滑液支原体大约2～3周后可发生关节炎。猪滑液支原体主要感染扁桃体，且会持续性感染至成年期，偶尔也可能会造成全身性感染。猪常在遭受应激后而感染，如：转群、疫苗免疫等，潜伏期大约3～10天。急性感染期大约持续2周时间，在此期间，病原体会通过血液循环系统传染至关节及全身各组织(如：脾脏、肺脏等)。

　　母源抗体水平或猪群的免疫状况、菌株毒力、生产管理或生物安全、猪群品种及饲养环境等众多因素均会影响支原体感染相关关节炎的临床表现。但是，目前尚不知道以上某一单一因素对疾病致病过程影响的大小。

　　临床症状

　　猪鼻支原体感染可能会导致多发性浆膜炎与多发性关节炎，通常多发于3～10周龄的猪只，偶发于其它大龄猪只。猪只常在感染后3～10天表现临床症状，并持续大约10～14天(依据疾病严重程度及是否存在混合感染的状况而有所不同)。患猪出现食欲不振、精神沉郁、不愿走动、跛行、关节肿大等临床表现。此外，结膜炎与耳炎也常与猪鼻支原体感染有关。

　　猪滑液支原体感染所引致的猪只跛行常发生于3～5月龄的猪，常在一只或多只腿发生急性关节炎。患猪呈现的临床症状包括跛行，关节肿大、僵硬、疼痛或不适，猪只不愿站立。临床症状可能持续3～10天，此后跛行的严重性逐渐减缓，很多患猪甚至可自愈。但是当存在混合感染或存在如剥脱性骨软骨炎(osteochondritis dissecans)等关节病变时，临床症状可能会持续。患有传染性关节炎并出现跛行的猪只可能呈现或不呈现关节肿大。但大部分患猪在走动过程中常会表现不适或不愿站立，需进行进一步的检查评估。

　　动物与样品的选择与采集程序

　　应选择临床症状为跛行、关节肿大、不愿站立、频繁交替承重肢(shifting hind-limb lameness),或走路时步态痛苦或不自然的保育猪、生长猪及育肥猪。最好选择发病急且未经过抗生素治疗的患猪用于实验室诊断。具有长时间跛行、关节蓄脓、躺卧、消瘦等临床症状的慢性病猪常存在其它混合感染，将阻碍诊断准确性，应尽量不要挑选这种患猪用于诊断。送检的患猪在采样前应首先进行安乐死。应尽量避免送检已经病死的猪只，因为病猪的疾病发展过程可能是慢性的或因非传染性因素而致死，无法对病死猪进行临死前检查，或以上因素兼而有之。

　　依据实验室检测的目的来决定正确的采样程序。一般来说，实验室检测有两个不同的目的。第一：某一特定临床病例的确诊;第二：对疾病进行流行病学调查，以了解某一特定的群体中某种疾病的流行状况、发病率或易感猪的大小等信息。

　　虽然猪滑液支原体与猪鼻支原体可能存在于未感染动物的上呼吸道，但欲确诊支原体感染相关的关节炎需要在患猪关节中检测到病原体的存在，并观察到滑液组织中呈现特征性组织病理病变。

　　在对患猪进行临床观察后进行病理剖检，并对所有关节与全身各系统的病变进行观察评估。观察到浆液纤维素性或纤维素性脓液性多发性浆膜炎、关节炎等大体病变则预示着可能存在猪鼻支原体感染。但副猪嗜血杆菌与猪链球菌感染也可引致相似的病变。猪滑液支原体感染时，关节中通常有大量的黄色或黄褐色的浆液性纤维素性的或浆液性出血性的粘液。滑膜层色泽较暗，呈现水肿、增生或充血等病变。

　　切开肘部、膝关节、跗关节、肩关节等处的皮肤，对局部进行消毒以降低外源病原感染的机率，然后利用适宜大小的针头从以上关节腔内收集滑液(见图3A)。也可向兽医诊断实验室送检患病完整的猪腿，以代替送检组织样品与关节液。

　　当发现纤维素性胸膜炎时，应送检肺脏组织，此时应怀疑可能存在猪鼻支原体感染。若出现大量的渗出液或多发性浆膜炎时，也可以送检心包液、胸腔液与腹腔液。当多发性浆膜炎比较严重时，也可以送检新鲜的或经过福尔马林固定过的心脏，或其它腹腔组织器官，如肝脏、脾脏等。

　　当关节腔内关节液较少时，也可在仔细切开关节后，利用多个拭子无菌收集关节液(见图3B)。采集多片滑膜组织，并浸泡在10%的福尔马林中以用于组织病理学观察。确诊时，除了发现病原体外，还应观察到特征性病理组织学病变。也可对感染部位进行外科消毒处理后，使用无菌注射器与针头从活猪肿大的关节内采集关节液。这种操作的优点在于不需对猪只进行安乐死。但是，这种样品采集方法会使猪只感觉不适，通常需要先对猪进行镇定后再进行采样。　 

支原体感染所致关节炎诊断及治疗

　　图3：A.在实验室诊断之前，从临床表现为跛行的6周龄仔猪关节腔内采集关节液。

　　B.利用棉拭子从关节腔内采集样品用于检测。(照片来自爱荷华州立大学兽医诊断实验室)

　　通过对从断奶至育肥不同生长阶段的猪群进行有代表性的采样检测，可判定支原体感染在某一猪群中的流行状况，也可对某一特定的猪群持续性的采样监测一段时间，以从纵向角度判定支原体感染所致的关节炎在该猪群的流行状况。有代表性的采样检测分析可了解某一特定猪群在某一段时期内支原体阳性患猪的数量。但此方法的不足之处是：所选猪群的支原体流行状况可能无法代表整个猪群。故为了判定猪群滑液支原体或猪鼻支原体的感染时间或判断阳性猪群的感染状况，更适合采用从水平角度研究或对猪群进行持续性研究的方法。但是，无论哪种方法，都需要根据疾病发生状况与猪群状态(如：若猪群胎次结构比较稳定，所需研究的动物组数可少些)来选取多组动物进行研究分析。应分别采集鼻腔拭子与扁桃体刮取物样品，不可将两种样品混合后再进行综合分析。因为鼻腔拭子样品中常会检测到猪鼻支原体，而扁桃体刮取物更适于猪滑液支原体的检测。

　　送检样品

　　向兽医诊断实验室送检样品时应完整而详细的了解疫病的病史与临床状况等。完整的病史信息包括描述发病动物的临床症状、大小、数量、死亡率及鉴别诊断等信息。在向诊断实验室提交关节液或渗出液前应将样品转移到聚苯乙烯管内以避免样品在转移过程中发生泄漏、交叉污染或损坏等。应将关节液或其拭子、组织样品、渗出液、完整关节或四肢等样品放置在冰块上，并在采集样品后24小时内送至兽医诊断实验室。转运时应将拭子样品放置在转运培养基内(如：Amies运送培养基)以防止样品脱水。浸泡在10%的福尔马林溶液中的组织样品应进行相应的标识、包装等处理，以防止溶液发生泄漏。若不具备适宜的样品采集条件或设备，可送检感染猪只的整个猪腿或整个活猪只，且最好选择急性发病猪。所有送检至兽医诊断实验室的样品应保持新鲜，在输运前或运输过程中应处于冷藏状态。

　　诊断分析

　　实时定量PCR是迄今为止最敏感的支原体检测方法。目前已将实时定量PCR方法用于猪鼻支原体与猪滑液支原体的检测，该法可直接用于临床样品(如关节液)、关节拭子、鼻腔拭子或扁桃体刮取物等的检测。也可以根据需要进行细菌分离培养。若有必要，也可对所分离培养的菌株进行进一步的特性分析，如进行抗生素耐药性分析等。但细菌分离培养是件非常耗时的工作，有时会因其它细菌的过度生长而影响分离培养的结果。支原体只有在特定的培养基内才能够生长，这对支原体的分离培养工作提出了特殊的要求。

　　观察支原体感染所造成的特征性组织病理病变对于确诊支原体感染所致的关节炎是非常有必要的。滑液支原体感染的微观病变包括滑膜异常增生，滑膜绒毛中等程度的增生、水肿并伴随有单核细胞浸润性炎。猪鼻支原体感染常可导致浆膜与滑膜内有大量的单核细胞与嗜中性粒细胞浸润，从而导致慢性感染的患猪软骨受侵蚀、关节翳形成。

　　对于支原体阳性猪群，仔猪体内的母源抗体可持续至断奶后的一段时间，但母源抗体具体的持续期尚未研究清楚。对某一特定猪群断奶仔猪的抗体水平进行持续性监测可用来确定猪群感染支原体的时间。即使在猪体内监测不到支原体抗体的情况下，PCR检测结果呈阳性也是很常见的。猪群在试验条件下感染滑液支原体后，其体内抗体可持续6个月。支原体在猪扁桃体内的感染程度常与患猪的抗体水平呈正相关。同样，上市猪体内的支原体抗体水平越高，其扁桃体内存在支原体感染的可能性越大。

　　图4：A 样品来自于12周龄的生长猪，患猪临床表现为跛行，利用实时定量PCR检测患猪关节液，滑液支原体呈阳性。病理切片显示慢性增生性滑膜炎，滑膜发生单核细胞浸润性炎症，滑膜细胞增生肥大(箭头所示)(H&E染色，放大倍数：100倍)。B：样品来自6周龄的仔猪，患猪关节肿大，利用实时定量PCR检测患猪关节液，猪鼻支原体呈阳性。星号(*)表示滑膜呈现纤维素性化脓性炎，滑膜下结缔组织内有大量单核细胞与嗜中性粒细胞。箭头表示滑膜细胞增生肥大。(H&E染色，放大倍数：100倍)。照片来自于爱荷华州立大学兽医诊断实验室。

　　为正确诊断支原体所致的关节炎，请牢记：

　　l 对病程进行准确而彻底的调查对于猪跛行病因的确诊至关重要。

　　2应挑选未经治疗且急性发病的跛行猪只送至兽医诊断实验室进行确诊。

　　3应将关节液、关节拭子、经10%的福尔马林处理过的滑膜或患猪的整个猪腿送至兽医诊断实验室进行跛行原因诊断分析。

　　4PCR检测、关节液或拭子培养等方法对于确诊是否存在支原体感染非常有帮助。

　　5对支原体感染所致关节炎的确诊需要确认存在病理病变，同时确定感染组织中存在病原体。

　　6若存在其它任何问题，请及时与兽医诊断实验室进行沟通。